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油茶花青素還原酶基因克隆和體外功能研究

作者:黃貝; 李龍寶; 吳信潔; 何周; 陳子怡; 姚芳; 楊華; 宛曉春 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶樹生物學(xué)與資源利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 安徽合肥230036; 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院應(yīng)用化學(xué)系; 安徽合肥230036

摘要:花青素還原酶(ANR)是催化花青素還原形成單體兒茶素的關(guān)鍵酶。油茶(Camellia oleifera Abel.)屬于山茶科山茶屬植物,其花青素還原酶基因尚未被克隆和功能分析。本研究采用RT-PCR技術(shù),克隆獲得了兩條油茶花青素還原酶基因的全長(zhǎng)序列,CoANR1基因全長(zhǎng)1441bp,開放閱讀框(ORF)長(zhǎng)度為1047bp,編碼348個(gè)氨基酸殘基,與茶樹ANR1基因的蛋白序列同源性為97%;CoANR2基因全長(zhǎng)1413bp,ORF框長(zhǎng)度為1014bp,編碼337個(gè)氨基酸殘基,與茶樹ANR2基因的蛋白序列同源性為99%。采用大腸桿菌表達(dá)方法獲得CoANR1和CoANR2重組蛋白,純化蛋白經(jīng)體外酶活檢測(cè)能夠催化矢車菊色素合成兒茶素(C)和表兒茶素(EC),催化飛燕草色素合成沒(méi)食子兒茶素(GC)和沒(méi)食子表兒茶素(EGC)。本研究為進(jìn)一步研究油茶兒茶素合成的分子機(jī)制提供了重要的研究基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

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