摘要:目的克隆廣藿香中廣藿香醇合酶(PTS)基因的cDNA序列,并構(gòu)建其pRI101-PTS植物表達載體。方法利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)獲得PTS基因的cDNA序列,利用生物信息學軟件對T-A克隆后的序列進行分析,預測其編碼蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)和功能。以環(huán)形聚合酶延伸克隆(CPEC)構(gòu)建pRI101-PTS過表達載體。結(jié)果PTS基因的開放閱讀框全長1659bp,編碼552個氨基酸。該蛋白分子量為64.1ku,等電點為5.39,含有DDxxD保守序列,具有2個倍半萜合酶結(jié)構(gòu)域,C末端結(jié)構(gòu)域268個氨基酸殘基可能涉及線性萜烯的環(huán)化,成功構(gòu)建了pRI101-PTS過表達載體。結(jié)論PTS的克隆、植物過表達載體的構(gòu)建及生物信息學分析為其他倍半萜類合成酶基因的發(fā)現(xiàn)和研究提供了參考,也為進一步研究其生物合成調(diào)控機制甚至代謝工程奠定基礎(chǔ)。
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