時間：2023-03-02 15:07:26
序論：在您撰寫訪學邀請函時，參考他人的優(yōu)秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發(fā)您的創(chuàng)作熱情，引導您走向新的創(chuàng)作高度。
邀請函發(fā)放成功與否是學術(shù)會議是否成功的關(guān)鍵，即使會議內(nèi)容再好，請的講者再權(quán)威，如果邀請不到重點客戶，這場會議就達不到預期的效果。
發(fā)邀請函看似是個很簡單的事情，似乎只是從代表手里遞到客戶手里如此簡單的動作。但是我相信絕大多數(shù)人新人第一次遞邀請函不會很成功，因為我也犯過同樣的錯誤，一上來直接就遞上邀請函，說“X主任，您好，我們公司在XX時候有場關(guān)于XX的學術(shù)會議，您有時間嗎？”沒有探尋客戶的需求，沒有放大客戶的利益，沒有炒作會議主題，除非你和主任客情關(guān)系非常好，不然多半就以各種理由推脫，或者就是當面答應，你走后隨手往抽屜里一扔，忘到九霄云外。所以說這是失敗的邀請。再說了，如今產(chǎn)品學術(shù)會議多的使人眼花繚亂，主任即使要參加會議，他又憑什么就會參加你們公司的會呢？筆者以為在處方藥學術(shù)推廣的營銷方式里，如何專業(yè)有效的發(fā)放邀請函是至關(guān)重要第一步。
專業(yè)的邀請函發(fā)放應該包括6個步驟：1、拜訪計劃2、引導交談3、炒作會議講者及講課內(nèi)容4、處理異議5、到會的確認6、跟進。下面筆者就用一個實例來加以說明。背景是XX公司要舉辦一次關(guān)于偏頭痛的治療與預防以及該公司產(chǎn)品某藥品在偏頭痛中的治療經(jīng)驗交流的學術(shù)會議，大會主席是XX醫(yī)院的W教授，邀請的講者是山東XX醫(yī)院A教授，時間是下周六下午兩點。邀請對象是市級某三甲醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科主任。
1，首先是炒作會議主題，這是需要做訪前計劃的，這個計劃應該是圍繞此次的學術(shù)會議主題所準備的，比如我們此次舉辦的是偏頭痛的規(guī)范治療學術(shù)會議，所以我們應當去了解目前醫(yī)生是否有比較系統(tǒng)規(guī)范的治療指南及流程。初步判定他所感興趣的話題，來炒作會議主題，讓他看到此次學術(shù)會議所能帶給他的利益。這是價值利益銷售的關(guān)鍵。其次請記住主任的時間是很寶貴的，所以你要在見面后最短的并且最合適的時間內(nèi)將自己的拜訪目的表述清楚，以至于不會讓客戶覺得你是在浪費他的時間。
“主任，您好！我是XX公司的小張，負責XX產(chǎn)品的，不知道您還有印象沒？”
“哦，知道的，你有什么事嗎？”
“我剛看門診上患者還挺多的，偏頭痛患者占了不少。您看您是這方面的專家，您一定在偏頭痛的治療上有自己很多經(jīng)驗，我今天是想就偏頭痛的規(guī)范治療和您做個探討，耽誤您5分鐘您看可以嗎？”
“偏頭痛是吧？行，你坐。”
2，因為這里所用的是一個相關(guān)疾病問題所做的開場白，所以80%是可以得到允許的，接著就要開始引導交談，探尋。我們可以運用引導交談探尋技巧識別客戶的需求，并通過開放式及封閉式提問漏斗般的得出真正的需求，并放大及確認引起他的重視。
“謝謝主任，您所遇到的偏頭痛的患者應該是不計其數(shù)了吧，那么偏頭痛對患者的生活，家庭造成了怎樣的困擾呢？”
“偏頭痛是一種常見病，多發(fā)病，對社會經(jīng)濟和患者生活都造成比較嚴重的影響，發(fā)病輕重不一啊，輕則影響正常工作生活，重則生活不能自理，并且最近兩年確實有調(diào)查說偏頭痛患者在逐漸增加，可能跟環(huán)境和壓力也有很大關(guān)系。”
“那偏頭痛就患者本身而言會導致什么樣的后果呢？”
“那并發(fā)癥多哦，像什么小腦梗死，腦白質(zhì)病變，并且還有增加發(fā)生腦卒中及不穩(wěn)定心絞痛的風險?！?/p>
“也就是說偏頭痛不僅僅只是頭痛，而是可以帶來那么多不堪設(shè)想的隱患及后果，是嗎？“
“確實是這樣的?！?/p>
“如果有很好的治療方案為患者進行系統(tǒng)的規(guī)范的治療，能夠緩解乃至改善癥狀，那么對患者來說可是對工作，生活，家庭都有了很大的幫助。那么您在這方面是專家，您是如何治療偏頭痛的呢？”
“偏頭痛的治愈確實能為患者帶來很大的變化，但是現(xiàn)在并沒有一個系統(tǒng)的規(guī)范治療方案，大家都是經(jīng)驗性治療，根據(jù)偏頭痛的類型啊，癥狀啊進行對癥治療，也很復雜，所以治愈率也不是很高?！?/p>
“也就是說，我們現(xiàn)在是缺乏一套規(guī)范的系統(tǒng)的治療方案，如果有的話是對您和患者來說是能幫助解決當前很多問題的，是非常有價值的，對嗎？”
“是的?！?/p>
3，上面已經(jīng)確認出客戶的真正需求，“一個系統(tǒng)的規(guī)范的治療偏頭痛方案”。這時候時機成熟，我們就可以立馬亮劍----亮出我們能滿足他需求的學術(shù)會議的邀請函。
“像您剛說到的這個問題，其他醫(yī)院的老師確實也都存在，也令很多老師真的是頭疼。我們?yōu)榱送苿雍钡貐^(qū)在治療偏頭痛領(lǐng)域發(fā)展，更好的加強學術(shù)交流，所以特別邀請了XX醫(yī)院的A教授來做偏頭痛的報告，交流偏頭痛的診斷與防治專家共識，這是會議邀請函，剛好能為您在偏頭痛治療上帶來一些新的學術(shù)信息?！?/p>
“哦，邀請的A教授是吧？”
“是的，A教授是中華醫(yī)學會神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)委員會的副主任委員，曾經(jīng)還在美國XXX醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科工作過，是《中華內(nèi)科雜志》《臨床神經(jīng)病學雜志》等多本醫(yī)學雜志的編委，也主編了多本著作。您應該知道他吧？”
4，當你做好了鋪墊工作已經(jīng)遞上了邀請函時，客戶多半會拋出異議，這個異議可能是客戶真實擔心的問題，也可能只是拒絕的托辭，所以我們應該按照處理異議的4步法則來進行處理。澄清--回答--核實--延續(xù)
“恩，A教授我知道，看過他的一些文章，還不錯，是什么時候？”
“是的，A教授發(fā)表的很多關(guān)于神經(jīng)內(nèi)科學的文章都得了不少獎項。會議時間是下周六下午2點，因為考慮到各位老師周六一般下午有時間，所以特意安排在這個時候，并且提前一周來邀請，您也好安排時間?！?/p>
“那好吧，到時候有時間沒有別的安排我會去的?！?/p>
5，其實到這里事情還沒有敲定，他并沒有和你達成協(xié)議，只是敷衍的說沒別的安排是會去的。所以接下來我們的到會確認是非常重要的。
“不知道您對會議還有沒有什么其他的擔憂？”
“A教授的會以前我沒有參加過，文章寫的可以，但不知道講的怎么樣，本來這段時間醫(yī)院就比較忙！”
“我理解您的擔心，畢竟您的時間是很寶貴的，如果在一場毫無意義的會議上浪費幾個小時是非常不值得的。而且主任您放心，公司特別注重此次會議，我們還特別邀請了湖北XX醫(yī)院的W教授做大會主席，我們?nèi)パ埖臅r候，W教授聽說是請A教授來講，立馬就答應了，因為他聽過A教授的課，講的非常好。加上我們所邀請的嘉賓全部是湖北地區(qū)神經(jīng)內(nèi)科的主任專家，是絕對保證會議質(zhì)量的。您在神經(jīng)內(nèi)科界也是很有聲譽的，您也可以將您在這方面的治療經(jīng)驗分享給其他老師。所以說這次會議對您和對其他專家都是很有價值的?！?/p>
“下周六下午2點半是吧？好的。我會去的?！?/p>
“那您看我下周五早上再給您打個電話提醒下，怕您到時候事情一多給忘了時間，周六中午1點30我到您家樓下接您。您看可以嗎？”
“那行，你直接到醫(yī)院來接我吧，我早上還在醫(yī)院上班?！?/p>
“好的，那我就不耽誤您了，主任再見！”
“再見！”
專業(yè)的邀請函發(fā)放應該包括6個步驟：1、拜訪計劃2、引導交談3、炒作會議講者及講課內(nèi)容4、處理異議5、到會的確認6、跟進。下面筆者就用一個實例來加以說明。背景是XX公司要舉辦一次關(guān)于偏頭痛的治療與預防以及該公司產(chǎn)品某藥品在偏頭痛中的治療經(jīng)驗交流的學術(shù)會議，大會主席是XX醫(yī)院的W教授，邀請的講者是山東XX醫(yī)院A教授，時間是下周六下午兩點。邀請對象是市級某三甲醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科主任。
1，首先是炒作會議主題，這是需要做訪前計劃的，這個計劃應該是圍繞此次的學術(shù)會議主題所準備的，比如我們此次舉辦的是偏頭痛的規(guī)范治療學術(shù)會議，所以我們應當去了解目前醫(yī)生是否有比較系統(tǒng)規(guī)范的治療指南及流程。初步判定他所感興趣的話題，來炒作會議主題，讓他看到此次學術(shù)會議所能帶給他的利益。這是價值利益銷售的關(guān)鍵。其次請記住主任的時間是很寶貴的，所以你要在見面后最短的并且最合適的時間內(nèi)將自己的拜訪目的表述清楚，以至于不會讓客戶覺得你是在浪費他的時間。
“主任，您好！我是XX公司的小左，負責XX產(chǎn)品的，不知道您還有印象沒？”
“哦，知道的，你有什么事嗎？”
“我剛看門診上患者還挺多的，偏頭痛患者占了不少。您看您是這方面的專家，您一定在偏頭痛的治療上有自己很多經(jīng)驗，我今天是想就偏頭痛的規(guī)范治療和您做個探討，耽誤您5分鐘您看可以嗎？”
“偏頭痛是吧？行，你坐?！?/p>
2，因為這里所用的是一個相關(guān)疾病問題所做的開場白，所以80%是可以得到允許的，接著就要開始引導交談，探尋。我們可以運用引導交談探尋技巧識別客戶的需求，并通過開放式及封閉式提問漏斗般的得出真正的需求，并放大及確認引起他的重視。
“謝謝主任，您所遇到的偏頭痛的患者應該是不計其數(shù)了吧，那么偏頭痛對患者的生活，家庭造成了怎樣的困擾呢？”
“偏頭痛是一種常見病，多發(fā)病，對社會經(jīng)濟和患者生活都造成比較嚴重的影響，發(fā)病輕重不一啊，輕則影響正常工作生活，重則生活不能自理，并且最近兩年確實有調(diào)查說偏頭痛患者在逐漸增加，可能跟環(huán)境和壓力也有很大關(guān)系。”
“那偏頭痛就患者本身而言會導致什么樣的后果呢？”
“那并發(fā)癥多哦，像什么小腦梗死，腦白質(zhì)病變，并且還有增加發(fā)生腦卒中及不穩(wěn)定心絞痛的風險。”
“也就是說偏頭痛不僅僅只是頭痛，而是可以帶來那么多不堪設(shè)想的隱患及后果，是嗎？“
“確實是這樣的。”
“如果有很好的治療方案為患者進行系統(tǒng)的規(guī)范的治療，能夠緩解乃至改善癥狀，那么對患者來說可是對工作，生活，家庭都有了很大的幫助。那么您在這方面是專家，您是如何治療偏頭痛的呢？”
“偏頭痛的治愈確實能為患者帶來很大的變化，但是現(xiàn)在并沒有一個系統(tǒng)的規(guī)范治療方案，大家都是經(jīng)驗性治療，根據(jù)偏頭痛的類型啊，癥狀啊進行對癥治療，也很復雜，所以治愈率也不是很高?！?/p>
“也就是說，我們現(xiàn)在是缺乏一套規(guī)范的系統(tǒng)的治療方案，如果有的話是對您和患者來說是能幫助解決當前很多問題的，是非常有價值的，對嗎？”
“是的?！?/p>
3，上面已經(jīng)確認出客戶的真正需求，“一個系統(tǒng)的規(guī)范的治療偏頭痛方案”。這時候時機成熟，我們就可以立馬亮劍----亮出我們能滿足他需求的學術(shù)會議的邀請函。
“像您剛說到的這個問題，其他醫(yī)院的老師確實也都存在，也令很多老師真的是頭疼。我們?yōu)榱送苿雍钡貐^(qū)在治療偏頭痛領(lǐng)域發(fā)展，更好的加強學術(shù)交流，所以特別邀請了XX醫(yī)院的A教授來做偏頭痛的報告，交流偏頭痛的診斷與防治專家共識，這是會議邀請函，剛好能為您在偏頭痛治療上帶來一些新的學術(shù)信息?！?/p>
“哦，邀請的A教授是吧？”
“是的，A教授是中華醫(yī)學會神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)委員會的副主任委員，曾經(jīng)還在美國XXX醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科工作過，是《中華內(nèi)科雜志》《臨床神經(jīng)病學雜志》等多本醫(yī)學雜志的編委，也主編了多本著作。您應該知道他吧？”
4，當你做好了鋪墊工作已經(jīng)遞上了邀請函時，客戶多半會拋出異議，這個異議可能是客戶真實擔心的問題，也可能只是拒絕的托辭，所以我們應該按照處理異議的4步法則來進行處理。澄清--回答--核實--延續(xù)
“恩，A教授我知道，看過他的一些文章，還不錯，是什么時候？”
“是的，A教授發(fā)表的很多關(guān)于神經(jīng)內(nèi)科學的文章都得了不少獎項。會議時間是下周六下午2點，因為考慮到各位老師周六一般下午有時間，所以特意安排在這個時候，并且提前一周來邀請，您也好安排時間。”
“那好吧，到時候有時間沒有別的安排我會去的。”
5，其實到這里事情還沒有敲定，他并沒有和你達成協(xié)議，只是敷衍的說沒別的安排是會去的。所以接下來我們的到會確認是非常重要的。
“不知道您對會議還有沒有什么其他的擔憂？”
“A教授的會以前我沒有參加過，文章寫的可以，但不知道講的怎么樣，本來這段時間醫(yī)院就比較忙！”
“我理解您的擔心，畢竟您的時間是很寶貴的，如果在一場毫無意義的會議上浪費幾個小時是非常不值得的。而且主任您放心，公司特別注重此次會議，我們還特別邀請了湖北XX醫(yī)院的W教授做大會主席，我們?nèi)パ埖臅r候，W教授聽說是請A教授來講，立馬就答應了，因為他聽過A教授的課，講的非常好。加上我們所邀請的嘉賓全部是湖北地區(qū)神經(jīng)內(nèi)科的主任專家，是絕對保證會議質(zhì)量的。您在神經(jīng)內(nèi)科界也是很有聲譽的，您也可以將您在這方面的治療經(jīng)驗分享給其他老師。所以說這次會議對您和對其他專家都是很有價值的?！?/p>
“下周六下午2點半是吧？好的。我會去的?！?/p>
“那您看我下周五早上再給您打個電話提醒下，怕您到時候事情一多給忘了時間，周六中午1點30我到您家樓下接您。您看可以嗎？”
“那行，你直接到醫(yī)院來接我吧，我早上還在醫(yī)院上班?！?/p>
“好的，那我就不耽誤您了，主任再見！”
“再見！”
6，邀請函是很成功的發(fā)送出去了，接下來所承諾的跟進也是不可缺少的環(huán)節(jié)。
為了推進我校區(qū)“持續(xù)優(yōu)化，建設(shè)精品校區(qū)”目標的實施，促進各項工作的深入開展，尤其是深化“問題導學，合作探究，高效課堂”的課題研究，進一步提高教育教學質(zhì)量。我校區(qū)決定在XX年4月13--14日舉辦“楓葉初中教學開放日”活動。誠摯邀請各市、區(qū)領(lǐng)導、社會各界人士、兄弟學校領(lǐng)導、教師、學生家長蒞臨指導！歡迎您提出寶貴意見和建議，我們將不勝感激！并以此達到增進交流，共同發(fā)展的目的。
開放內(nèi)容：各學科課堂教學模式展示：英語學科分級、分層教學的閱讀課“倒三角”模式，議論文寫作“五步法”；語文學科“五個一”，以數(shù)學學科為代表的理科“三環(huán)節(jié)”、政治學科“案例教學”、漢語中心“3+2”等教學模式。
學生活動有：各班班會、學生特長活動、英語藝術(shù)節(jié)、中文詩詞朗誦比賽。書法及美術(shù)作品、研究性學習展覽等。同時學校各實驗室、圖書館、宿舍、食堂等全面開放。
mailbox xx
xxxxx university xx, xx, p. r. china, zipcode
dear dr. xxxx
it is my pleasure to invite you as a visit scholar(or postdoc) to visit , from xx-xx to xx-xx. .
i understand you will be supported by a scholarship from the china scholarship council.
you will be performing research under my direction, and with members of my group, on the fields of xxxxx . you shall be provided an office and access to our lab and other research facilities as appropriate.
我校將于2019年5月18日(星期五)上午舉辦教學開放日暨初一招生咨詢活動。
誠摯歡迎各位領(lǐng)導、專家、同行及我區(qū)優(yōu)秀小學畢業(yè)生家長蒞臨指導。
一、活動主題：“智慧促進專業(yè)成長，特色彰顯綜合素質(zhì)”
定于XX年5月11日上午舉行教學開放日活動。主題是:“共同學習，快樂體驗”，現(xiàn)邀請您走進校園、走進教室，與孩子一起上課、一起參與活動，了解課堂管理、學校要求，體驗孩子在校的學習生活，以此為契機探索教育孩子的方法，以便共同教育孩子。現(xiàn)把相關(guān)事項通知以下：
一、活動內(nèi)容
1、聽課。了解孩子上課表現(xiàn)、狀態(tài)，了解上課常規(guī)及要求。
2、參觀。參觀學校、班級文化氛圍建設(shè)，觀摩課堂、課間活動，了解學校教育教學的要求和情況。
3、觀看表演。觀看學校跳繩隊表演，了解學校特色教育，體驗孩子豐富的學習活動。
4、參與活動。學校舉行大課間毽繩體育活動，家長可以自帶器材，與自己的孩子共同參與跳繩、踢毽球活動。
二、上課地點及時間安排
附1：家長開放日上課安排表
節(jié)次
課程
班級
第二節(jié)（9:15-9:55）
第三節(jié)(10:05-11:00)
科目
任教教師
上課地點
科目
主持教師
活動地點
一（1）班
音樂
xx
音樂室
讀書主題活動
xx
一（1）課室
一（2）班
數(shù)學
xx
一（2）課室
xx
一（2）課室
二（1）班
數(shù)學
xx
二（1）課室
xx
二（1）課室
二（2）班
體育
x
足球場
xx
二（2）課室
三（1）班
電腦
科學
xx
xx
電腦室
自然室
xx
三（1）課室
三（2）班
數(shù)學
xx
三（2）課室
xx
三（2）課室
四（1）班
體育
xx
籃球場
xx
四(1)課室
四（2）班
英語美術(shù)
xx
xx
語音室
美術(shù)室
xx
四（2）課室
五（1）班
數(shù)學
xx
五(1)課室
xx
五（1）課室
五（2）班
數(shù)學
xx
五（2）課室
高芬芳
五（2）課室
六（1）班
英語
體育
xx
xx
電教室
羽毛球場
中小銜接主題班會
xx
六（1）課室
六（2）班
英語
xx
六(2)班
xx
六（2）課室
附2：家長開放日活動安排時間表
時間
活動安排
8：45—9：10
家長到校:參觀學校、班級文化建設(shè)等
9：15—9：55
家長隨堂聽課。地點：子女所在班級
9：55—10：05
家長簽到（各班主任處），課間休息
10：05－11：00
1---5年級讀書主題活動。6年級中小銜接主題班會
11：00－11：10
課間休息
11：10－11：35
參與大課間活動。地點：學校操場
11:35—11:45
觀看學校跳繩隊表演。地點：學?；@球場
11：45－11：55
校長致辭
11：55－12：00
家長及學生退場，結(jié)束本次開放日活動
三、注意事項
1、因是正常上課時間，學?，F(xiàn)有場地要用于學生活動，故不能提供停車位，請家長自行解決停車問題。
2、為了給學生一個榜樣作用，請家長不要穿拖鞋、背心等參加活動，做到衣著整潔、大方。
3、學校安排了家長休息室，內(nèi)設(shè)有吸煙區(qū)、飲水處。課間家長可以自行前往休息，校園內(nèi)除休息室其余地方請不要吸煙。
4、為了不影響孩子們上課，請家長準時參加，在打預備鈴后快速進入課室并保持安靜。
【關(guān)鍵詞】 龍血竭;含藥血清;蛋白沉淀
龍血竭為傳統(tǒng)中藥,是龍舌蘭科植物劍葉龍血樹[Dracaena cochinchinensis(Lour)S.C.Chen]含樹脂木材的乙醇提取物[1]。龍血竭總黃酮(sanguis draconis flavones,SDF)是從龍血竭中提取得到的主要成分[2],包括黃酮、二氫黃酮、黃烷、查耳酮、二氫查耳酮等20多種化合物[3]。動物實驗表明,龍血竭總黃酮能對抗整體動物心肌缺血損傷[2]。本實驗將龍血竭HPLC圖譜征峰較明顯的5個成分的峰面積作為檢測指標(其中2個主要成分為龍血素A和龍血素B),以龍血竭原溶液為對照計算體外加樣后提取百分率,進行血清處理方法的研究。
1、儀器與試劑
Waters高效液相色譜儀:515 HPLC泵,2487雙波長吸收監(jiān)測器,N2000雙通道色譜工作站(浙江大學智能信息工程研究所);TDL802B臺式離心機(上海安亭科學儀器廠);超聲儀(上海超聲波儀器廠);TU1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);ZH2 BLENDER渦旋混合器(天津藥典標準儀器廠)。
廣西產(chǎn)龍血竭(廣西中醫(yī)學院制藥廠提供);龍血素A、龍血素B對照品(中國藥品生物制品檢定所提供);乙腈(色譜純);甲醇,乙酸乙酯,丙酮,正丁醇,乙醚,三氯甲烷,正戊醇,95%乙醇,無水乙醇,三氯醋酸,均為分析純;新西蘭大耳白兔(廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供)。
2、HPLC法的建立
2.1色譜條件
色譜柱:Diamonsil C18(5 μm,250 mm×4.6 mm);保護柱:Easyguard C18 Replacement Cartridges Cat#6101;流動相:乙腈1%冰醋酸(體積比38∶62);檢測波長:280 nm;流速:1.2 mL/min。
2.2溶液的制備
取龍血素A、龍血素B對照品適量,用甲醇分別配制成每1 mL含10 μg的溶液,作為對照品溶液。
取廣西龍血竭,用甲醇配制成每1 mL含2 mg的溶液,0.45 μm微孔濾膜濾過,續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.3線性范圍
將龍血素A對照品溶液分別配制成濃度為0.925、4.625、9.250、13.875、18.500、23.125 μg/mL的溶液,進樣10 μL,記錄色譜圖,進樣量(m)與峰面積(A)的回歸方程為:A=45 064 451m-10 379 768,r=0.999 2,線性范圍為9.25~231.25 ng。
同上,將龍血素B對照品溶液分別配制成濃度為0.947、4.735、9.470、14.205、18.940、23.675 μg/mL的溶液,進樣10 μL,記錄色譜圖,進樣量(m)與峰面積(A)的回歸方程為:A=33 227 615m-10 135 858,r=0.999 0,線性范圍為9.47~236.75 ng。
2.4穩(wěn)定性試驗
取“2.2”項下的供試品溶液分別于0、2、4、6、8、24 h進行檢測,分別記錄5個特征性成分的峰面積,相應峰面積的RSD值分別為1.83%、3.09%、2.89%、2.47%、2.05%,即供試品溶液在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。
2.5供試品溶液HPLC圖譜
取“2.2”項下的供試品溶液,龍血素A、龍血素B對照品溶液及空白血清樣品,各進樣10 μL,記錄HPLC圖譜,見圖1。
圖1供試品溶液(A)、龍血素A對照品(B)、龍血素B對照品(C)及空白血(D)HPLC圖譜 略
含中藥龍血竭的血清處理方法研究在供試品溶液圖譜上選取5個特征峰較明顯的成分作為檢測指標,保留時間分別為10.232、15.498、26.665、35.732、38.732 min,其中峰4和峰5經(jīng)驗證,確定為龍血素A(4′羥基2,4二甲氧基二氫查耳酮)和龍血素B(4′羥基2,4,6三甲氧基二氫查耳酮)[4],峰1、2和3結(jié)構(gòu)未知。由上圖可知,空白血清樣品無干擾。
3、結(jié)果與討論
3.1提取率的計算
特征性成分的提取率=血清樣品征性成分的峰面積/供試品溶液相應成分的峰面積×100%
3.2血漿樣品的處理方法
3.2.1蛋白沉淀劑的選擇
實驗中發(fā)現(xiàn),供試品溶液與10%三氯醋酸會發(fā)生反應,出現(xiàn)混濁現(xiàn)象,故使用常用的蛋白沉淀劑甲醇、乙腈、無水乙醇、丙酮進行處理。
由兔耳緣靜脈取血約2 mL,置離心管中,加入供試品溶液1 mL,渦旋混合,分別加入各種蛋白沉淀劑甲醇、乙腈、無水乙醇和丙酮適量,離心,取上清液,水浴揮干后精密加入1 mL甲醇,超聲溶解,0.2 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液10 μL進行HPLC檢測。以供試品溶液5個指標性成分的峰面積為對照,計算得各成分的提取率見表1。
表1不同蛋白沉淀劑制備含藥血清的特征峰的提取率 略
從表1可見,以甲醇作蛋白沉淀劑對5個特征峰的提取率均較低,丙酮次之,乙腈和無水乙醇相對高一些,但對峰3的提取率均低于50%,證明4種處理過程均無法避免血漿蛋白對藥物的吸附,無法達到理想的提取效果。
按上述實驗步驟,在分別加入蛋白沉淀劑后,加入與血樣同等量的乙酸乙酯,提取3次,渦旋混合,離心,取乙酸乙酯層,合并提取液,水浴揮干,精密加入1 mL甲醇,超聲溶解,經(jīng)0.2 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液10 μL進行HPLC檢測。以供試品溶液5個指標性成分的峰面積為對照,計算得各成分的提取率見表2。
從表2可見,含藥血清在使用不同蛋白沉淀劑后,通過同種有機溶媒——乙酸乙酯進行提取,可不同程度提高5個特征性成分的提取率,以無水乙醇組提高效果最不明顯,甲醇、乙腈、丙酮組均有顯著提高,且乙腈組對5個特征峰的提取率均達到80%以上。
表2不同蛋白沉淀劑與溶媒結(jié)合提取制備含藥血清的特征峰的提取率 略
3.2.2提取次數(shù)的選擇
使用乙腈作為蛋白沉淀劑,加入與血樣同等量的乙酸乙酯,分別按2、3、4次進行提取,水浴揮干后精密加入1 mL甲醇,超聲溶解,0.2 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液10 μL進行HPLC檢測。以供試品溶液5個指標性成分的峰面積為對照,計算得各成分的提取率見表3。
表3不同提取次數(shù)制備含藥血清的特征峰的提取率 略
由表3結(jié)果可見,使用與血樣同等量的乙酸乙酯提取3次(見圖2)的效果明顯優(yōu)于提取2次,當提取次數(shù)為4次時,對各特征性成分的提取率影響則較小,再增加提取次數(shù)意義不大。
3.2.3提取溶劑的選擇
使用乙腈作為蛋白沉淀劑,采用其他種類提取溶劑如正丁醇、乙醚、氯仿對血樣進行處理。以供試品溶液5個指標性成分的峰面積為對照,計算各成分提取率見表4。
圖2含中藥龍血竭血清HPLC圖譜 略
表4不同提取溶劑制備含藥血清的特征峰的提取率 略
正丁醇對于峰2、4、5的提取率達到80%以上,但對峰1和3的提取率均低于75%;而乙醚和氯仿對峰3的提取率均低于50%,不及使用乙酸乙酯為提取溶劑的效果。
4、結(jié) 論
將含中藥龍血竭的血清先通過乙腈沉淀血漿蛋白,再使用與血樣同等量的乙酸乙酯提取3次,可使龍血竭中5個特征性成分的提取率達到80%以上。本研究結(jié)果可為中藥龍血竭的體內(nèi)藥動學研究提供依據(jù)。
【參考文獻】
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