時間：2023-03-06 16:04:59
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香梨是我區(qū)主要栽培果樹之一，種植歷史悠久。但是長期以來缺乏科學合理的施肥技術(shù)，導致肥料利用率低，生理病害加重，嚴重影響到香梨的產(chǎn)量和品質(zhì)。本試驗通過在香梨樹上開展氮、磷、鉀不同用量的小區(qū)試驗，確立氮磷鉀最佳比例，為科學施肥提供依據(jù)。
二、材料與方法
（一）試驗地基本情況
試驗設置在實驗林場9隊，11年生香梨樹（2012年為連續(xù)實施的第三年），畝44株，樹體生長整齊。土壤肥力均勻，O～60cm土壤中有機質(zhì)10.9g/kg、全氮0.56g/kg、堿解氮42mg/kg、有效磷11.2mg/kg、速效鉀64mg/kg、總鹽1.62g/kg、PH7.78。
（二）試驗設計
本試驗地近三年目標產(chǎn)量為2500公斤，以生產(chǎn)1噸香梨氮磷鉀素吸收量分別以5.2公斤、2.5公斤和6.6公斤為依據(jù)，共設13個處理，每處理10株樹。
氮肥設5個水平：不施氮（NO），N1、N2、N3、N4分別是目標產(chǎn)量下氮素吸收量的100%、200%、250%和300%。
磷肥設4個水平：不施磷（PO），P1、P2、P3分別是目標產(chǎn)量下磷素吸收量的200%、300%、和400%。
鉀肥設4個水平：不施鉀（K0），K1、K2、K3分別是目標產(chǎn)量下磷素吸收量的50%、100%、和200%。
三、結(jié)果與分析
（一）各處理施肥水平對樹體營養(yǎng)生長的影響
1、增施有機肥較不施肥處理主莖增長1.35am，增加22.0%，增加新梢生長長度0.56%，增加百葉干重1.4%，葉片干物質(zhì)率提高了2.2%。
2、增施氮肥可有效提高葉片干重。百葉干重呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢。N4水平的新梢增長最明顯，較不施氮肥增長了17.1%；N2、N4水平的百葉鮮重分別比N0水平增加7.03%和9.52%；N2、N4水平的百葉干重分別比N0水平增加5.19%和1.82%。
3、增施磷肥對主莖周長、新梢長度和葉片鮮重均有明顯作用。P1水平主莖周長增加最大，較P0水平增加1.9cm；P2、P3水平新梢長度分別比PO水平增加14.1%和16.2%，百葉鮮重分別比PO水平增加16.5%、11.5%，百葉干重分別比PO處理增加23.1%和14.3%。
4、施用鉀肥對增加主莖周長、葉片有一定作用，對增加香梨新梢長度無顯著影響。
（二）不同施肥水平對梨樹葉片中氮磷鉀含量的影響
增施氮磷鉀肥可以較大幅度的提高香梨葉片的養(yǎng)分含量。氮提高10%～22.0%、磷提高5.7%～7.5%、鉀提高15.0%。其中：N2、N4水平的葉片含N量分別比NO水平提高9.8%和21.9%；P2、P3水平的葉片含P量分別比PO水平提高5.7%和7.5%；K2、K3水平的葉片含K量分別比KO水平增加2.0%和15.0%。
（三）不同施肥水平對香梨產(chǎn)量的影響
三年試驗結(jié)果顯示：施肥對香梨產(chǎn)量具有顯著的影響，增施有機肥可提高產(chǎn)量9.7%。隨著施氮、磷、鉀肥量的增加，產(chǎn)量增產(chǎn)幅度均呈顯先上升后下降趨勢，N1、N2、N 3處理的產(chǎn)量分別比N0處理提高15.4%、15.9和14.3%、P1、P 2、P 3處理的產(chǎn)量分別比P0處理提高16.7%、22.4%和13.0%、K1、K2、K 3處理的產(chǎn)量分別比KO處理增加11.1%、16.1%和13.5%。
（四）不同肥力條件下氮磷鉀比例
應用DPS統(tǒng)計軟件，分別三年的氮、磷、鉀因素與產(chǎn)量進行回歸分析，得出：
低肥力梨園（有機質(zhì)小于10g/kg、速效氮小于60mg/kg、速效磷小于12 mg/kg、速效鉀小于80 mg/kg），氮磷鉀施肥比例為1：0.90：0.94。
7月中旬，據(jù)德國《明鏡周刊》披露，大眾汽車以80億歐元收購保時捷跑車業(yè)務。一周以后，保時捷監(jiān)事會也發(fā)表了聲明：保時捷CEO文德金正式下課，原因是“如果他不再繼續(xù)任職，對保時捷未來的戰(zhàn)略發(fā)展將更加有利”。
此消息一出，全世界都為之震驚，這證實了保時捷控股陷入沉重債務危機的傳聞。保時捷家族不得不以出售跑車業(yè)務給大眾汽車的方式來降低保時捷高達百億的負債。根據(jù)兩個公司達成的協(xié)議，雙方將組成一家新的汽車公司――“大眾―保時捷”。
“汽車教父”費迪南德?保時捷
他是大眾“甲殼蟲”的設計者，也是保時捷的奠基人；他為希特勒設計過戰(zhàn)車，也為老百姓設計買得起的汽車。
大眾收購保時捷，對于好事者來說，已經(jīng)超越了簡單的商業(yè)收購范疇，隱藏在背后的家族紛爭，才是真正的話題。提起這兩大汽車品牌，就不得不從一個關(guān)鍵人物說起，這就是保時捷和大眾的奠基人、“汽車教父”費迪南德?保時捷。
費迪南德?保時捷1875年出生于捷克，家中排行老三，父親是當?shù)匾粋€鐵匠。他年輕時就顯露出對機械制造的天分和興趣。小學畢業(yè)后，便在父親的工場做學徒，白天幫父親干活，晚上到維也納技術(shù)學校上夜校，這也是他接受到的唯一的系統(tǒng)的工程訓練。
1898年，費迪南德加入位于維也納的Ludwig Lohner公司，并于1899年開發(fā)了名為Lohner-Porsche的電動汽車，這是第一部以“保時捷”命名的汽車，是如今大紅大紫的電動汽車的雛形，一舉奠定了費迪南德?保時捷“汽車教父”的地位。
1906年，費迪南德來到奧地利的戴姆勒汽車公司，并于1916年升至分公司的總裁。1926年，戴姆勒汽車與當時的奔馳汽車合并，新公司董事會決定大力開發(fā)豪華型轎車，而費迪南德的目標卻是設計生產(chǎn)所有老百姓都買得起的汽車。這一想法自然受到了董事會的否決，1929年費迪南德離開了。1931年4月，費迪南德在德國斯圖加特成立了自己的“保時捷發(fā)動機與飛機設計有限責任公司”，這便是保時捷公司的前身。
1933年1月，希特勒上臺僅11天就親自主持了柏林汽車展的開幕式，并發(fā)表演講表示要創(chuàng)造一種全新的“國民轎車”。這與費迪南德的想法不謀而合，希特勒親自點名由費迪南德主導設計，并要求他在28個月內(nèi)拿出樣車。1935年柏林汽車展上，希特勒宣布了“國民轎車”即將到來的消息。在這里，他第一次使用了“大眾汽車”一詞。1936年10月，3輛樣車終于按時完成，這就是以后風靡壘球的“甲殼蟲”。于是希特勒決定在德國中部沃爾夫斯堡建立工廠，新工廠命名為“大眾汽車”，費迪南德出任總工程師，1939年7月開始正式生產(chǎn)“甲殼蟲”汽車。可不到一個月生產(chǎn)就停止了。因為希特勒已經(jīng)決心發(fā)動世界大戰(zhàn)，汽車廠轉(zhuǎn)眼變成了兵工廠，費迪南德不得不為希特勒設計軍事戰(zhàn)車，包括他為希特勒設計了威震歐洲戰(zhàn)場的“虎式坦克”和“象式坦克殲擊車”。
此時的費迪南德全身心投入在沃爾夫斯堡的大眾汽車公司上，位于斯圖加特的保時捷跑車設計的工作便交給了兒子費里?保時捷，父子分別掌管大眾和保時捷。因為和德國納粹的關(guān)系，二戰(zhàn)結(jié)束后，費迪南德、他的兒子費里，以及女婿安東?皮耶希都被美國人以戰(zhàn)爭罪行逮捕，隨后被交給了法國，幫助當時的雷諾開發(fā)新車。兒子費里在監(jiān)獄度過3個月后被釋放，費迪南德和女婿則繼續(xù)被關(guān)押在法國。
此時從都靈來了一份活――意大利跑車公司Cisitalia的總經(jīng)理Piero Dusio委托費里設計一款賽車。費里用設計這輛車賺來的錢將骨瘦如柴的老父親從法國的監(jiān)獄贖了回來。在給法國人免費打了20個月的工后，一家人終于又團聚了。
1947年，兒子費里正式接替父親成為保時捷的主席。而費迪南德則在兒子的攙扶下，戰(zhàn)旨首次回到仍在英國人占領之下的沃爾夫斯堡，回到了大眾汽車。這是個讓他實現(xiàn)畢生夢想的地方，也是讓他深陷囹圄的地方?？粗约寒斈暝谝粡埌准埳辖ㄔ炱饋淼墓S和流水線上大量生產(chǎn)的“甲殼蟲”，費迪南德百感交集。由于常年埋頭于設計，加上法國監(jiān)獄惡劣的生活條件，費迪南德的健康受到很大的損害。不久，費迪南德中風，并于1951年1月30日在沃爾夫斯堡逝世。終年77歲。
家族的分裂
費迪南德有一子一女，女兒路易絲和女婿安東?皮耶希一直打理著大眾的業(yè)務，兒子費里一直專注于保時捷的跑車設計，兩個二代繼承人分工明確，相處和諧。但到了第三代，幾個表兄弟之間爭權(quán)奪勢，將這個家族一分為二――“保時捷”家族和“皮耶?！奔易?。
費迪南德去世之前，他的女兒路易絲?皮耶希和女婿安東?皮耶希一直在奧地利全力打造大眾汽車進口業(yè)務。費迪南德去世后，姐姐路易絲和弟弟費里各擁有保時捷公司50％的股份，這也就為以后保時捷和皮耶希家族之爭埋下了伏筆。1952年，也就是費迪南德去世一年后，女婿安東?皮耶希也在奧地利去世。路易絲接過丈夫留下的擔子，全權(quán)負責大眾汽車銷售業(yè)務，而費里則全身心投入到保時捷跑車設計生產(chǎn)上。
費里與妻子朵羅絲?雷茲共育有4子，而姐姐路易絲也有3個兒子1個女兒。隨著兩個家族第三代繼承人逐漸加入到公司的管理層，表兄弟之間為了公司領導權(quán)的爭斗也越來越激烈。首先要說的便是現(xiàn)任大眾汽車監(jiān)事會主席小費迪南德?皮耶希，他是路易絲的兒子。1963年4月大學畢業(yè)后，他開始在自己家族的跑車公司工作。他是個沖勁很足的年輕人，從最底層做起，短短幾年時間，不僅掌管了賽車部，而且還管理著一個有200名汽車工程師的部門。盡管一直飽嘗資金不足和人手不足的雙重壓力，但他仍然堅持了下來，并最終獲得了成功。
皮耶希的對手是舅舅費里的大兒子，比自己大兩歲的表哥亞歷山大?保時捷。這個隨遇而安的年輕人也跟這個家族的其他人一樣愛車，他全身心投入到藝術(shù)設計中。1981年，亞歷山大便完成了保時捷經(jīng)典車型911的外形設計，創(chuàng)造了跑車史上的經(jīng)典。但他對權(quán)力的追求遠遠不如自己的表弟，對公司政治基本上毫無興趣，面對皮耶希的緊逼之勢，保時捷一家總是落于下風。
盡管皮耶希在事業(yè)上取得了成功，但是他跋扈的風格，花錢大手大腳的習慣也惹怒了保時捷家族的一些成員。1972年，眼看著繼承權(quán)的爭斗即將給公司帶來嚴重后果的嚴峻時刻，為了平息事態(tài)，維持公司的長遠發(fā)展，費里無情地解雇了好斗的外甥，并決定保時捷公司從此將由非家族成員進行管理。
關(guān)鍵詞：信用擔保 擔保定價 理論模型
一、引言
擔保費（擔保定價）是擔保機構(gòu)收入的主要來源。一般而言，擔保費應該能覆蓋擔保機構(gòu)的運行成本。擔保費不能高得使中小企業(yè)望而卻步，亦不能低得使擔保機構(gòu)承受過多的風險。過高或過低的擔保費率都不利于擔保機構(gòu)的發(fā)展。通過擔保定價設計合理的擔保費率是擔保機構(gòu)可持續(xù)發(fā)展的必要條件。這也是國內(nèi)外學者比較關(guān)注信用擔保定價的主要原因。普通商品定價理論是微觀經(jīng)濟學研究的重點，主要有勞動價值論、效用價值論及新古典經(jīng)濟學的一般均衡理論。勞動價值論認為商品的價值由勞動決定，且其價值會隨著勞動者的技能及社會技術(shù)水平的提高而下降。效用價值論認為商品的價值由消費者的效用決定，效用越大價值越高，商品價值與商品的生產(chǎn)成本無關(guān)。一般均衡理論認為在一個經(jīng)濟體中以生產(chǎn)者尋求利潤最大化，消費者尋求效用最大化為前提，供給等于需求時的價格就是商品的價值。雖然上述普通商品定價理論都立足于各自的視角，但是其包含了一個共同的內(nèi)在屬性：面向歷史。勞動價值論認為商品的價值是社會必要勞動時間，此“時間”是過去的時間。效用價值論認為商品的價值是給消費者帶來的效用，該效用也是歷史意義下的時間。一般均衡理論中決定商品價值的供求關(guān)系也是歷史的。普通商品的定價理論中找不到未來的概念，面向歷史的屬性使得定價理論避免了主觀概率驅(qū)動下不確定性的沖擊。20世紀90年代以來，信貸配給理論、利率的逆向選擇及激勵效應理論為貸款擔保定價提供了理論依據(jù)。信貸配給是信貸市場上的典型現(xiàn)象，表現(xiàn)為：在無差別的貸款申請人中，有些人即使愿意支付更高的利率也得不到貸款。由于信息不對稱，銀行在發(fā)放貸款前，很難判斷借款人的經(jīng)營狀況和風險，對借款人的違約概率無法精確估計，因此，銀行往往會要求收取額外的風險補償。風險較大的借款人愿意支付額外風險補償獲取借款，而風險較小的借款人者往往會選擇退出。高利率雖然會給銀行帶來高收益的預期，但是，高利率也會激勵借款人傾向于投資高風險項目，也即通過利率逆向選擇及激勵效應降低了銀行的收益。中小企業(yè)信用擔保是擔保機構(gòu)向銀行等金融機構(gòu)提供被擔保企業(yè)的債務擔保，當被擔保企業(yè)不能向金融機構(gòu)償還債務時，擔保機構(gòu)就要履行代償責任（信用風險）?？梢?，擔保機構(gòu)提供擔保后并不立即履行代償責任，只有在被擔保企業(yè)不能償還債務時，擔保機構(gòu)才需要代償。顯而易見，銀行的信貸配給、利率的逆向選擇及激勵效應，包括擔保機構(gòu)的信用風險都具有滯后性，也即面向未來。正是面向未來的屬性使得現(xiàn)有中小企業(yè)信用擔保定價理論必然面臨對未來不確定性的估算，也即中小企業(yè)信用擔保定價理論無法避免的核心內(nèi)容是對違約概率的估算。
二、國內(nèi)外中小企業(yè)信用擔保定價研究述評
（ 一 ）國外相關(guān)研究：具有翔實數(shù)據(jù)的實證分析1840年，瑞士第一次將擔保內(nèi)容寫入了銀行法，這標志著現(xiàn)代信用擔保制度的開始。20世紀30、40年代，世界經(jīng)濟危機爆發(fā)，西方國家為復興經(jīng)濟紛紛創(chuàng)建政策性信用擔保制度。1945年，第二次世界大戰(zhàn)后，政策性信用擔保制度在拉丁美洲、亞洲等國家也獲得了快速的發(fā)展。而現(xiàn)代信用擔保制度主要發(fā)展和成熟于美國。自Samuelson（1969）提出擔保定價以來，國外的學者和專家開始了對信用擔保定價方面的研究。西方對于擔保定價的早期研究主要集中于債券擔保的定價，公司債券一般在資本市場交易，資產(chǎn)價格容易獲得，關(guān)于融資擔保價值的定價方法研究中，一般都假定擔保人無違約風險（即由政府提供擔保）。隨著作為金融衍生工具的期權(quán)的出現(xiàn)，探討期權(quán)的定價理論與方法已成為二十世紀以來乃至未來的研究熱點。Davisand Panas（1991）、Perrakis和Ryan（1994）Ritchken（1995）等成功探討了歐式期權(quán)的定價理論。Lo（1997）、Ball 和Torous（1996）、Merton（1998）將期權(quán)定價理論成功運用于相關(guān)領域，極大地拓展了期權(quán)的運用范圍。其中，Duan Jin-Chuan（1999）、Lai van Son（1999）將期權(quán)定價理論運用于商業(yè)銀行存款保險的定價領域，這無疑是二十世紀金融學研究的重大突破。學者們運用數(shù)理模型進行擔保定價的主要思路是：利用信用風險模型計算出一項貸款資產(chǎn)在未來一定時期的損失數(shù)額，然后通過一定的補償機制為貸款進行定價。其關(guān)鍵是：通過運用風險計量技術(shù)對貸款風險進行科學評估，確定特定類型企業(yè)、特定結(jié)構(gòu)貸款的損失率分布函數(shù)，據(jù)以計算預期損失、非預期損失、波動率，完成貸款的科學定價，包括準確地計提風險成本和確定風險溢價。由于信用擔保制度在國外的悠久歷史及國外信息數(shù)據(jù)庫的便捷服務，國外對信用擔保定價的實證研究較多。ChenA.H.Y（1970）分析了動態(tài)市場環(huán)境下的擔保定價模型。Alan Doran， Jacob Levitsky（1997）對全球100多個國家的信用擔保體系進行了研究，發(fā)表了《基于全球視角的中小企業(yè)信用擔保計劃》，從擔保對象、執(zhí)行機制、風險分擔、擔保機構(gòu)的治理和收費結(jié)構(gòu)等不同角度進行了闡述。關(guān)于擔保費，該學者認為：擔保收費應合理反映擔保人、債權(quán)人和被擔保人各自分擔的風險，同時應考慮到擔保分擔比例；擔保費的設計應該保證兩點：一是擔保費不應該高得使銀行不會在不需要擔保時濫用擔保；二是擔保費又不能低得致使銀行拒絕為中小企業(yè)貸款；擔保費和擔保基金的投資收益應能夠覆蓋擔保代償損失和擔保運營支出。Michel Dietsch和Joceel Petey（2002）以22000家法國中小企業(yè)為樣本數(shù)據(jù)，通過樣本企業(yè)得出信用轉(zhuǎn)移矩陣，并據(jù)此估算貸款損失的概率密度函數(shù)，在此基礎上計算VaR值和邊際風險收益，由此推導出一個適合中小企業(yè)貸款的內(nèi)部信用風險模型。通過該模型，我們可以模擬出一個貸款組合的目標收益函數(shù)，由此推算一個貸款組合中每筆貸款的風險調(diào)整價格。Teresa Graham（2004）發(fā)表了《英國小企業(yè)貸款擔保計劃總結(jié)報告》，Teresa Graham總結(jié)了英國二十多年的小企業(yè)貸款擔保計劃的歷史經(jīng)驗，分析其存在的弊端，提出改進方案。同時，Teresa Graham在報告中指出2％的擔保費率是比較合理的水平。
（ 二 ）國內(nèi)相關(guān)研究：基于金融模型的創(chuàng)新與應用目前我國中小企業(yè)信用擔保市場還處于賣方市場，擔保機構(gòu)采用的擔保定價方法主要是經(jīng)驗法，也稱專家評估法，一般是按擔?？傤~的某一固定比率計算出基本價格，再結(jié)合被擔保企業(yè)的具體情況進行適當調(diào)整。經(jīng)驗定價法依賴于評估人員的經(jīng)驗，主觀性比較強，缺乏科學性。我國許多學者試圖從不同角度構(gòu)建信用擔保定價模型，從而對擔保定價方法展開探索研究，力求逼近真實價值，使其更加科學、具有合同柔性和可操作性。
（1）期權(quán)定價模型。1973年，Black和Scholes 給出了歐式期權(quán)定價的解析模型，成為對金融資產(chǎn)定價實踐最具有影響力的模型。現(xiàn)有研究中，較多學者專注基于期權(quán)定價理論的擔保定價模型，如林昆輝（2000）、姬毅（2002）、楊明（2006）、許有傳（2007）等，他們的共識是：債務人（被擔保企業(yè)）與擔保人（擔保機構(gòu)）之間簽訂的擔保合約實質(zhì)上相當于一份期權(quán)合約。對于債務人而言，若如期償還本息，其損失的僅是擔保費；若債務人到期不能如數(shù)償還本息，則擔保人必須按擔保合約約定履行代償義務。當債務人（被擔保企業(yè)）的價值小于所擔保的債務價值時，擔保責任為兩者之差。從全額擔保來進行分析，當前者大于或等于后者時，擔保責任為零。由此可見，對債務人來講，簽訂擔保合約相當于買入了一份看跌期權(quán)，對擔保方來講，則賣出了一份看跌期權(quán)。但研究視角各不相同。林昆輝（2000）從理論和實證兩方面論述了如何運用Black-Scholes的期權(quán)定價模型確定擔保定價的問題。姬毅（2002）在深入闡述現(xiàn)代期權(quán)理論和貸款擔保定價關(guān)系基礎上，重點解析了貸款擔保定價中的參數(shù)選擇，并輔以案例，佐證期權(quán)定價方法的可行性。楊明（2006）以有限責任體制下的中小企業(yè)為視角，以企業(yè)的經(jīng)營風險水平和資產(chǎn)負債率為主要參數(shù)，構(gòu)造出在這個擔保體系下?lián)C構(gòu)的基本擔保費率和商業(yè)銀行的基本貸款利率模型，該模型表明，信用擔保能有效降低銀行的貸款風險，增強中小企業(yè)的融資能力，改善中小企業(yè)的融資環(huán)境。許有傳（2007）從最低現(xiàn)金流要求角度，考察最低凈現(xiàn)金流要求與擔保定價的關(guān)系，基于企業(yè)最低現(xiàn)金流要求對企業(yè)還款意愿的重要影響，給出基于最低凈現(xiàn)金流要求的信用擔保期權(quán)定價方法。以上都是從單期情況下討論擔保定價問題。由于破產(chǎn)將帶來一系列的社會負面影響，如失業(yè)、利稅損失、銀行貸款損失甚至政局不穩(wěn)定等問題，因此，從社會影響的宏觀層面來說，破產(chǎn)是公司最后無奈的選擇。而從擔保機構(gòu)微觀層面來講，在某些情況下，通過給被擔保企業(yè)一定期限的債務展期，可能會情況會出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)。由于被擔保企業(yè)在擔保機構(gòu)的監(jiān)督及激勵下經(jīng)營狀況發(fā)生好轉(zhuǎn)，資金收益水平得到了提高，或者由于所處行業(yè)的發(fā)展遇到發(fā)展契機而發(fā)生被擔保企業(yè)存量資產(chǎn)的大幅度增值，增長后被擔保公司的價值可能足以償還擔保機構(gòu)的代償債務及相關(guān)費用。在這樣的情形下，對于擔保機構(gòu)而言，通過對被擔保企業(yè)實施一定期限的債務展期可能是明智的。陳福權(quán)（2004）、顧海峰（2007）考慮到擔?，F(xiàn)實情況，將單期擔保進行展期。陳福權(quán)認為我國破產(chǎn)法規(guī)尚待健全，破產(chǎn)清償?shù)纳鐣杀咎?，債務展期的情況比較普遍，提出了兩階段期權(quán)擔保定價方法。顧海峰借鑒陳福權(quán)的債務展期思想，把存款保險風險定價的思路引入到信用擔保風險定價中，從準債權(quán)與準股權(quán)復合設置角度，提出了類似于優(yōu)先股模式的債務追索權(quán)，構(gòu)建了債務展期的擔保復合定價模型，同時，該學者還通過147家擔保公司的數(shù)據(jù)檢測了模型，指出模型對發(fā)展前景較好或者財務及經(jīng)營狀況比較穩(wěn)定的企業(yè)具有較高的適用性。顧海峰（2009）又將債務展期模型拓展為多階段展期金融契約的信用擔保定價模型，并推導出其數(shù)值求解方法，同時，實證了該模型的科學性及應用前景。郭艷（2009）在論述了多階段展期貸款擔保定價模型的基礎上，通過蒙特卡羅模擬，測算了影響多階段貸款擔保價值的影響因素有資產(chǎn)負債比、擔保比例、擔保期限以及被擔保方資產(chǎn)波動率，為擔保方規(guī)避風險，進行科學的擔保定價提供了決策依據(jù)。
（2）信用違約互換定價模型。信用違約互換是信用衍生工具最普遍的形式，其構(gòu)建原理為：商業(yè)銀行為了轉(zhuǎn)移信用風險而購買風險保護，但其必須支付費用，即商業(yè)銀行作為信用風險空頭；投資者承擔由商業(yè)銀行轉(zhuǎn)移的信用風險并獲取一定補償收益，即投資者作為風險多頭。在信用擔保合約中，中小企業(yè)因信用級別低而需要支付較之于大企業(yè)更高的信用價差，即中小企業(yè)支付給擔保機構(gòu)的擔保費用，相當于銀行賣出信用風險，讓出一定的收益；擔保機構(gòu)買入信用風險，獲取一定的收益。由此，信用擔保合約的原理和信用違約互換的作用原理類似，據(jù)此可以構(gòu)建一個信用違約互換以擬合簡單信用擔保合約，從而對信用擔保合約定價?；谏鲜鏊悸?，王瓊（2003）揭示了信用違約互換的規(guī)避信用風險機理及市場效用，最后給出了基于基權(quán)定價理論和KMV的預期違約率的信用違約互換的估值方法。佘云鵬（2006）在王瓊等研究的基礎上，認為信用擔保合約與信用違約互換的支付函數(shù)具有同構(gòu)性，構(gòu)建適當?shù)男庞眠`約互換合約及模擬信用擔保機構(gòu)的信用擔保合約，以信用違約互換的定價方式為信用擔保定價。
（3）信用度量術(shù)定價模型。信用度量術(shù)是國際上通行的一種衡量風險方法，該模型的核心思想是貸款組合價值受到兩方面的影響：債務人違約及債務人信用等級的轉(zhuǎn)移變化。模型首先估算貸款組合在債務人信用等級轉(zhuǎn)移變化下的價值分布，進而估算信用風險價值，也即在一定的期間內(nèi)，在給定的置信區(qū)間上，貸款組合可能發(fā)生的最大價值損失。唐吉平、陳浩（2004）分析了貸款信用保險定價，并比較了期權(quán)定價模型、貸款死亡模型和基于信用風險度量術(shù)模型，認為基于信用風險度量術(shù)模型比較具有可操作性，并在信用度量術(shù)的基礎上構(gòu)建了保險費率厘定模型，并運用實際數(shù)據(jù)對模型做了實證研究。信用度量術(shù)的核心是取得信用轉(zhuǎn)移矩陣。陳曉紅、陳堅（2007）認為信用度量術(shù)中的信用轉(zhuǎn)移矩陣是靜態(tài)的，采用的是歷史平均的信用轉(zhuǎn)移矩陣，沒有考慮到宏觀經(jīng)濟的影響，隨著宏觀經(jīng)濟的變化，每一年的違約率都會發(fā)生變化，貸款期限越長，市場風險越大，靜態(tài)信用轉(zhuǎn)移矩陣的誤差就越大。鑒于此，學者通過衡量宏觀經(jīng)濟波動對信用轉(zhuǎn)移矩陣的影響，構(gòu)建了動態(tài)的信用擔保定價模型，進一步發(fā)展了基于信用度量術(shù)的定價方法。
（4）VaR定價模型。VaR是國際通行最為普遍的風險模型。VaR即風險價值，是指在未來某個期間，某個給定的置信區(qū)間內(nèi)，資產(chǎn)組合可能出現(xiàn)的最大損失。陳曉紅（2005）采用國際通行的VaR風險模型，指出根據(jù)風險補償原理，擔保機構(gòu)的擔保費用包括風險收入和無風險收入。合理的風險收入至少覆蓋在給定的置信度水平下的最大損失值。陳曉紅采用的是絕對VaR值，是相對于0的損失，與期望值無關(guān)。鐘田麗等（2008）認為絕對VaR計算出投資者的絕對（相對于0）損失。但是，由于每個擔保機構(gòu)的風險偏好不同，正如，對于同一被擔保企業(yè)，有的擔保機構(gòu)愿意提供擔保，而有的擔保機構(gòu)不愿提供擔保，即各擔保機構(gòu)的期望收益不同，因此，鐘田麗等結(jié)合效用理論，提出了相對VaR定價法。對于貸款期限一年以上的風險衡量，相對VaR比絕對VaR更加準確和接近現(xiàn)實。
三、述評與展望
綜上所述，目前國外對于信用擔保定價其研究的出發(fā)點是基于對國外信用擔保機構(gòu)數(shù)十年，乃至上百年發(fā)展歷史的考察。同時國外的統(tǒng)計機構(gòu)對于信用擔保機構(gòu)的運營大都有一套完整的統(tǒng)計系統(tǒng)，這就為其實證分析提供了翔實的數(shù)據(jù)來源。而我國信用擔保的發(fā)展也就十幾年的歷史，很多地區(qū)對于信用擔保機構(gòu)的經(jīng)營情況不列入統(tǒng)計的范圍。此外，我國中小企業(yè)是“信息殘缺的”，很難從外部了解到有關(guān)企業(yè)的收入、利潤等信息，尤其是我國中小企業(yè)以民營為主，受經(jīng)濟體制影響，大部分企業(yè)信息與企業(yè)主個人信息交叉，企業(yè)財務管理制度混亂、賬表不全，內(nèi)控缺失，這就在一定程度上限制了對其實證研究的開展。由于我國信用擔保體系、資本市場的發(fā)展還不完善的大環(huán)境下，目前還沒有比較客觀、權(quán)威的信用評級公司，沒有現(xiàn)成的企業(yè)信用等級轉(zhuǎn)換概率和不同信用等級企業(yè)違約回收率數(shù)據(jù)資料，信用擔保定價還處于起步階段，學者們針對信用擔保定價的定量研究較少，而以構(gòu)建模型的居多。國內(nèi)學者紛紛將期權(quán)論引入到信用擔保的研究中，在違約風險計量和擔保費用定價方面占據(jù)了核心地位。值得注意的是，期權(quán)理論對信貸市場化程度不太高、利率競爭不充分的中國中小企業(yè)信用擔保市場的解釋力和理論指導作用不強。部分學者采用信用度量術(shù)定價法，但是由于信用轉(zhuǎn)移矩陣難以獲得，該方法在中小企業(yè)信用擔保定價的運用中受到限制。部分學者采用在信用度量術(shù)的基礎上，引入宏觀經(jīng)濟波動因素，將無條件信用轉(zhuǎn)移矩陣轉(zhuǎn)化為條件信用轉(zhuǎn)移矩陣，對信用擔保進行定價，該方法同樣存在信用矩陣難以獲取的現(xiàn)實困難。此外，很多模型是在單期的框架下討論擔保費率的定價，鑒于在擔保實務中，由于破產(chǎn)清償?shù)纳鐣杀咎?，一般情況下，債權(quán)債務雙方會協(xié)商進行債務展期，因此，單期的擔保定價在實際運用中缺乏柔性。顯然，由于我國信用擔保發(fā)展時間較短，信用擔保體系尚未完善，上述模型在實際應用中或多或少會受到資本市場發(fā)展、數(shù)據(jù)可得性等方面的限制。
筆者認為，我國中小企業(yè)信用擔保定價模型的構(gòu)建應遵循以下原則：可操作性原則。模型所需的數(shù)據(jù)能夠從現(xiàn)有的資本市場或相關(guān)機構(gòu)獲取，并且擔保公司人員可以精確度量；拓展性原則。模型不僅能滿足目前階段對信用風險度量的需求，而且還應能隨著外部環(huán)境的改善而適應未來的需求；行業(yè)性及地域性原則。不同行業(yè)、不同地域的信用擔保機構(gòu)所處的經(jīng)濟環(huán)境、金融市場結(jié)構(gòu)、稅收制度、客戶群體和客戶意識強弱各異，模型的選擇應考慮這些因素對最終度量效果的實質(zhì)影響。對中小企業(yè)信用擔保進行 “科學”定價必須引入定量化的數(shù)學分析方法。由于中小企業(yè)信用擔保定價需要大量的數(shù)據(jù)且與一國的金融市場完善程度相匹配。考慮到各類模型的優(yōu)勢、局限性和最佳適用范圍以及信用擔保機構(gòu)業(yè)務經(jīng)營對象的特殊性，要建立既符合國情又相對比較簡單的信用擔保定價模型，應選擇應采用循序漸進方式。從國外實踐來看，信用擔保定價方法的發(fā)展是一個不斷修正的漸進過程，需要信息服務、法律支持等多方面的建設與完善。
參考文獻：
［1］林昆輝：《擔保費的期權(quán)定價模型設計及實證研究》，《中南工業(yè)大學學報》2000年第12期。
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［8］Doran， A. & Levitsky J. Credit Guarantee Schemes For Small Business Lending —A Global Perspective，1997.
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保時捷是全球最知名的跑車公司，大眾汽車是歐洲最大的汽車制造商，兩個“同根生”的企業(yè)撐起了德國汽車工業(yè)三分之一的江山。最近，大眾汽車以80億歐元收購保時捷的跑車業(yè)務，這一消息讓全世界媒體歡呼雀躍，因為隱藏在這兩個企業(yè)背后的家族紛爭原本就像一出戲。
7月中旬，據(jù)德國《明鏡周刊》披露，大眾汽車以80億歐元收購保時捷跑車業(yè)務。一周以后，保時捷監(jiān)事會也發(fā)表了聲明：保時捷CEO文德金正式下課，原因是“如果他不再繼續(xù)任職，對保時捷未來的戰(zhàn)略發(fā)展將更加有利”。
此消息一出，全世界都為之震驚，這證實了保時捷控股陷入沉重債務危機的傳聞。保時捷家族不得不以出售跑車業(yè)務給大眾汽車的方式來降低保時捷高達百億的負債。根據(jù)兩個公司達成的協(xié)議，雙方將組成一家新的汽車公司――“大眾―保時捷”。
“汽車教父”費迪南德?保時捷
他是大眾“甲殼蟲”的設計者，也是保時捷的奠基人；他為希特勒設計過戰(zhàn)車，也為老百姓設計買得起的汽車。
大眾收購保時捷，對于好事者來說，已經(jīng)超越了簡單的商業(yè)收購范疇，隱藏在背后的家族紛爭，才是真正的話題。提起這兩大汽車品牌，就不得不從一個關(guān)鍵人物說起，這就是保時捷和大眾的奠基人、“汽車教父”費迪南德?保時捷。
費迪南德?保時捷1875年出生于捷克，家中排行老三，父親是當?shù)匾粋€鐵匠。他年輕時就顯露出對機械制造的天分和興趣。小學畢業(yè)后，便在父親的工場做學徒，白天幫父親干活，晚上到維也納技術(shù)學校上夜校，這也是他接受到的唯一的系統(tǒng)的工程訓練。
1898年，費迪南德加入位于維也納的Ludwig Lohner公司，并于1899年開發(fā)了名為Lohner-Porsche的電動汽車，這是第一部以“保時捷”命名的汽車，是如今大紅大紫的電動汽車的雛形，一舉奠定了費迪南德?保時捷“汽車教父”的地位。
1906年，費迪南德來到奧地利的戴姆勒汽車公司，并于1916年升至分公司的總裁。1926年，戴姆勒汽車與當時的奔馳汽車合并，新公司董事會決定大力開發(fā)豪華型轎車，而費迪南德的目標卻是設計生產(chǎn)所有老百姓都買得起的汽車。這一想法自然受到了董事會的否決，1929年費迪南德離開了。1931年4月，費迪南德在德國斯圖加特成立了自己的“保時捷發(fā)動機與飛機設計有限責任公司”，這便是保時捷公司的前身。
1933年1月，希特勒上臺僅11天就親自主持了柏林汽車展的開幕式，并發(fā)表演講表示要創(chuàng)造一種全新的“國民轎車”。這與費迪南德的想法不謀而合，希特勒親自點名由費迪南德主導設計，并要求他在28個月內(nèi)拿出樣車。1935年柏林汽車展上，希特勒宣布了“國民轎車”即將到來的消息。在這里，他第一次使用了“大眾汽車”一詞。1936年10月，3輛樣車終于按時完成，這就是以后風靡壘球的“甲殼蟲”。于是希特勒決定在德國中部沃爾夫斯堡建立工廠，新工廠命名為“大眾汽車”，費迪南德出任總工程師，1939年7月開始正式生產(chǎn)“甲殼蟲”汽車?？刹坏揭粋€月生產(chǎn)就停止了。因為希特勒已經(jīng)決心發(fā)動世界大戰(zhàn)，汽車廠轉(zhuǎn)眼變成了兵工廠，費迪南德不得不為希特勒設計軍事戰(zhàn)車，包括他為希特勒設計了威震歐洲戰(zhàn)場的“虎式坦克”和“象式坦克殲擊車”。
此時的費迪南德全身心投入在沃爾夫斯堡的大眾汽車公司上，位于斯圖加特的保時捷跑車設計的工作便交給了兒子費里?保時捷，父子分別掌管大眾和保時捷。因為和德國納粹的關(guān)系，二戰(zhàn)結(jié)束后，費迪南德、他的兒子費里，以及女婿安東?皮耶希都被美國人以戰(zhàn)爭罪行逮捕，隨后被交給了法國，幫助當時的雷諾開發(fā)新車。兒子費里在監(jiān)獄度過3個月后被釋放，費迪南德和女婿則繼續(xù)被關(guān)押在法國。
此時從都靈來了一份活――意大利跑車公司Cisitalia的總經(jīng)理Piero Dusio委托費里設計一款賽車。費里用設計這輛車賺來的錢將骨瘦如柴的老父親從法國的監(jiān)獄贖了回來。在給法國人免費打了20個月的工后，一家人終于又團聚了。
1947年，兒子費里正式接替父親成為保時捷的主席。而費迪南德則在兒子的攙扶下，戰(zhàn)旨首次回到仍在英國人占領之下的沃爾夫斯堡，回到了大眾汽車。這是個讓他實現(xiàn)畢生夢想的地方，也是讓他深陷囹圄的地方?？粗约寒斈暝谝粡埌准埳辖ㄔ炱饋淼墓S和流水線上大量生產(chǎn)的“甲殼蟲”，費迪南德百感交集。由于常年埋頭于設計，加上法國監(jiān)獄惡劣的生活條件，費迪南德的健康受到很大的損害。不久，費迪南德中風，并于1951年1月30日在沃爾夫斯堡逝世。終年77歲。
家族的分裂
費迪南德有一子一女，女兒路易絲和女婿安東?皮耶希一直打理著大眾的業(yè)務，兒子費里一直專注于保時捷的跑車設計，兩個二代繼承人分工明確，相處和諧。但到了第三代，幾個表兄弟之間爭權(quán)奪勢，將這個家族一分為二――“保時捷”家族和“皮耶希”家族。
費迪南德去世之前，他的女兒路易絲?皮耶希和女婿安東?皮耶希一直在奧地利全力打造大眾汽車進口業(yè)務。費迪南德去世后，姐姐路易絲和弟弟費里各擁有保時捷公司50％的股份，這也就為以后保時捷和皮耶希家族之爭埋下了伏筆。1952年，也就是費迪南德去世一年后，女婿安東?皮耶希也在奧地利去世。路易絲接過丈夫留下的擔子，全權(quán)負責大眾汽車銷售業(yè)務，而費里則全身心投入到保時捷跑車設計生產(chǎn)上。
費里與妻子朵羅絲?雷茲共育有4子，而姐姐路易絲也有3個兒子1個女兒。隨著兩個家族第三代繼承人逐漸加入到公司的管理層，表兄弟之間為了公司領導權(quán)的爭斗也越來越激烈。首先要說的便是現(xiàn)任大眾汽車監(jiān)事會主席小費迪南德?皮耶希，他是路易絲的兒子。1963年4月大學畢業(yè)后，他開始在自己家族的跑車公司工作。他是個沖勁很足的年輕人，從最底層做起，短短幾年時間，不僅掌管了賽車部，而且還管理著一個有200名汽車工程師的部門。盡管一直飽嘗資金不足和人手不足的雙重壓力，但他仍然堅持了下來，并最終獲得了成功。
皮耶希的對手是舅舅費里的大兒子，比自己大兩歲的表哥亞歷山大?保時捷。這個隨遇而安的年輕人也跟這個家族的其他人一樣愛車，他全身心投入到藝術(shù)設計中。1981年，亞歷山大便完成了保時捷經(jīng)典車型911的外形設計，創(chuàng)造了跑車史上的經(jīng)典。但他對權(quán)力的追求遠遠不如自己的表弟，對公司政治基本上毫無興趣，面對皮耶希的緊逼之勢，保時捷一家總是落于下風。
盡管皮耶希在事業(yè)上取得了成功，但是他跋扈的風格，花錢大手大腳的習慣也惹怒了保時捷家族的一些成員。1972年，眼看著繼承權(quán)的爭斗即將給公司帶來嚴重后果的嚴峻時刻，為了平息事態(tài)，維持公司的長遠發(fā)展，費里無情地解雇了好斗的外甥，并決定保時捷公司從此將由非家族成員進行管理。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取筆者所在醫(yī)院2016年6月-2017年7月100例膽囊息肉樣病變患者。納入標準：所有入選患者均經(jīng)相關(guān)檢查確診，符合手術(shù)指征。排除標準：膽囊合并其他疾病者（膽囊結(jié)石、膽囊癌等）;存在既往上腹部手術(shù)史者;妊娠期患者。男67例，女33例;年齡22～55歲，平均（37.91±4.74）歲;病程6個月～10年。所有患者術(shù)前無膽絞痛病史，無高血壓、糖尿病、冠心病、肝臟疾病、傳染性疾病等合并癥，肝生化檢驗結(jié)果正常，體質(zhì)指數(shù)<28 kg/m2。
1.2 方法
應用飛利浦IU22型、阿洛卡Fa6型及百勝Mylab Twice型彩色多普勒超聲顯像儀對患者進行術(shù)前超聲檢查，探頭頻率為2.5～5.0 MHz。超聲檢查前所有患者均常規(guī)禁食>8 h?；颊呷⊙雠P位，對膽囊進行連續(xù)性常規(guī)掃描，即對膽囊橫、縱、斜3個切面進行連續(xù)掃描。根據(jù)實際需要取左側(cè)臥位和膝胸臥位掃查膽系，觀察患者膽囊大小、息肉狀態(tài)、膽囊壁厚度、膽囊內(nèi)強回聲大小和數(shù)目、肝外膽管通暢情況等，通過多和多方位的掃描提高檢查結(jié)果的準確性。超聲檢查時重點觀察患者膽囊周圍和Calot三角區(qū)清晰與否，解剖關(guān)系是否存在變異等。檢查過程中，詳細記錄各項數(shù)據(jù)和參數(shù)，后期對患者膽囊息肉數(shù)量、大小、位置、膽囊壁厚度、病變情況等進行分析，進而對手術(shù)難度進行預測。根據(jù)預測結(jié)果將100例患者分為手術(shù)困難組（21例）和非手術(shù)困難組（79例）。手術(shù)困難組表現(xiàn)為膽囊有明顯萎縮或增大現(xiàn)象，且增大范圍>10 cm×4 cm，患者肝膽分界模糊，膽囊壁厚度>0.5 cm，膽總管直徑>0.7 cm，或患者有胰腺炎病史。非手術(shù)困難組表現(xiàn)為膽囊大小、形態(tài)正?；蚪咏?，且肝膽分界輪廓清晰，膽囊壁厚度≤0.5 cm，膽總管直徑≤0.7 cm，患者膽汁透聲性良好，且患者無胰腺炎病史。手術(shù)應用腹腔鏡手術(shù)系統(tǒng)，按電子腹腔鏡微創(chuàng)保膽術(shù)標準術(shù)式進行，結(jié)合超聲檢查結(jié)果，針對手術(shù)困難組給予手術(shù)改進措施。分析患者中轉(zhuǎn)開腹率情況、預后情況，分析彩超評估手術(shù)難易程度的價值。
1.3 觀察指標
（1）記錄中轉(zhuǎn)開腹例數(shù)，計算中轉(zhuǎn)開腹率。（2）記錄手術(shù)時間、術(shù)中失血量、術(shù)后住院時間及并發(fā)癥情況。
1.4 統(tǒng)計學處理
本組研究數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2 結(jié)果
2.1 術(shù)前彩超檢查100例患者手術(shù)難度預測符合率
術(shù)前彩超檢查預測為手術(shù)困難的患者為21例，21例均與手術(shù)中診斷一致，但漏診2例，手術(shù)難度預測符合率為98.0%（98/100）。
2.2 術(shù)中轉(zhuǎn)開腹及預后情況
手術(shù)困難組中轉(zhuǎn)開腹1例（4.76%），非手術(shù)困難組中轉(zhuǎn)開腹0例，兩組中轉(zhuǎn)開腹率對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。100例患者手術(shù)時間為（62.05±9.30）min，術(shù)中失血量為（74.60±13.40）ml，術(shù)后住院時間為（5.20±1.35）d。所有患者術(shù)后均無嚴重并發(fā)癥，均痊愈出院。
3 討論
膽囊是人體的重要消化器官，在食物營養(yǎng)吸收與消化方面有著至關(guān)重要的作用[3]。伴隨人們生活及行為方式的轉(zhuǎn)變，膽囊疾病的發(fā)病率不斷增高。臨床研究表明，不吃早餐、不健康飲食、飲食不衛(wèi)生、經(jīng)常飲酒、壓力過大等是導致膽囊息肉發(fā)生的主要因素[4-5]。膽囊息肉一旦發(fā)生后嚴重影響機體的消化功能，并可能導致膽囊癌的發(fā)生，應及早實施外科手術(shù)治療[6]。與傳統(tǒng)開腹手術(shù)相比，微創(chuàng)保膽術(shù)是近年來興起并廣泛應用的一種術(shù)式，是借助腹腔鏡等設備在直視下進行膽囊息肉切除治療，具有病灶切凈率高、術(shù)中出血少、手術(shù)創(chuàng)傷小、術(shù)后并發(fā)癥風險小、術(shù)后恢復快等優(yōu)勢[7-8]。對于有強烈保膽意愿、年齡小于50歲且符合手術(shù)適應證的患者均可采用微創(chuàng)保膽術(shù)治療，幫助患者有效保留膽囊的正常結(jié)構(gòu)和功能，減少對消化系統(tǒng)的損傷和影響[9-10]。盡管微創(chuàng)保膽術(shù)是現(xiàn)階段治療膽囊息肉的理想術(shù)式，但仍存在一定的中轉(zhuǎn)開腹率和手術(shù)并發(fā)癥情況[11]。如患者膽囊壁水腫增厚、膽囊周圍組織粘連，會增強息肉切除的難度，故應該嚴格掌握手術(shù)適應證，選擇性的進行手術(shù)，術(shù)前準確預測手術(shù)難易程度，鑒別手術(shù)困難患者，可以有效避免發(fā)生中轉(zhuǎn)開腹或嚴重手術(shù)并發(fā)癥[12]。
本研究選取100例膽囊息肉行微創(chuàng)保膽術(shù)患者，術(shù)前彩超檢查預測為手術(shù)困難的患者21例，非手術(shù)困難79例。非手術(shù)困難組79例成功完成腹腔鏡微創(chuàng)保膽手術(shù)治療;手術(shù)困難組術(shù)前彩超檢查提示存在膽囊粘連的4例患者中1例術(shù)中發(fā)現(xiàn)難以分離的粘連而中轉(zhuǎn)開腹手術(shù)，中轉(zhuǎn)開腹率為4.76%（1/21）;兩組的中轉(zhuǎn)開腹率對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明彩超評估手術(shù)難易程度具有重要的臨床指導價值。所有患者術(shù)后均未發(fā)生嚴重并發(fā)癥，直至痊愈后出院。
【摘要】 目的 構(gòu)建銅綠假單胞菌發(fā)光菌株，建立銅綠假單胞菌生物膜(biofilm，BF)模型，研究鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌成熟BF的影響及與環(huán)丙沙星合用是否具有協(xié)同殺菌作用。方法 將攜帶綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染銅綠假單胞菌，平板培養(yǎng)法培養(yǎng)銅綠假單胞菌BF，建立銅綠假單胞菌BF體外模型，經(jīng)鹽酸氨溴索作用后，掃描電鏡(scanning electron microscope，SEM)觀察鹽酸氨溴索對BF形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，熒光顯微鏡定性觀察鹽酸氨溴索對BF內(nèi)活菌的作用，通過發(fā)光菌株熒光強度定量分析鹽酸氨溴索單獨作用以及與環(huán)丙沙星聯(lián)用后BF內(nèi)活菌量。結(jié)果 鹽酸氨溴索作用后電鏡觀察可見黏液樣物變稀疏，不規(guī)則。鹽酸氨溴索濃度大于0.49mg/mlBF內(nèi)活菌數(shù)減少(F=18，P
【關(guān)鍵詞】 鹽酸氨溴索； 環(huán)丙沙星； 銅綠假單胞菌； 生物膜
ABSTRACT Objective To establish a biofilm model of Pseudomonas aeruginosa in vitro and observe the effect of ambroxol on biofilm of Pseudomonas aeruginosa， and study the synergistic effect with ciprofloxacin on tested specimens. Method Plasmids carried with green fluorescent protein (GFP) was tansfected to the strain of Pseudomonas aeruginosa. Plate culture method was used to establish biofilm model of Pseudomonas aeruginosa in vitro. After ambroxol was added to the biofilm， the appearance of the biofilm was detected by scanning electron microscope (SEM)， and the viable counts of bacterial in biofilm after treated by ambroxol alone and together with ciprofloxacin were determined by bio-fluorescence method. Result After adding ambroxol， the biofilm was thin and abnormal compared with the control by SEM detection. Further detection with fluorescence microscope showed the viable bacteria in biofilm was reduced significantly (F=18， P
KEY WORDS Ambroxol; Ciprofloxacin; Pseudomonas aeruginosa; Biofilm
生物膜(biofilm，BF)是細菌黏附在物體表面上形成的一種具有高度結(jié)構(gòu)性的膜狀復合物，其主要成分是細菌分泌的胞外基質(zhì)和細菌菌體［1］。BF可使細菌具有抵御宿主免疫系統(tǒng)和抗菌藥物殺傷作用，產(chǎn)生對抗菌藥物的高度耐藥性(可達到浮游狀態(tài)的10～1000倍)，導致感染難以治愈［2］。銅綠假單胞菌是常見細菌生物膜相關(guān)感染病原菌之一，銅綠假單胞菌生物膜的形成是呼吸機相關(guān)性感染難以控制的重要原因。作者曾研究氨溴索可顯著促進環(huán)丙沙星對細菌生物膜的透過［3］，本研究發(fā)現(xiàn)鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF有抑制作用，且與環(huán)丙沙星聯(lián)用后具有協(xié)同作用，增強殺菌活性，現(xiàn)報道如下。
1 材料和方法
1.1 材料
菌株P(guān)AO1(購自四川大學微生物實驗室)，Luria-Bertani培養(yǎng)基(LB，上海升博生物技術(shù)公司)，鹽酸氨溴索標準品(德國Boehringer Ingelheim)；環(huán)丙沙星標準品(重慶市藥品檢定所)，比濁儀(德國Siemens公司)，多功能酶標儀(美國BIORAD UV-3350型)，熒光顯微鏡(德國Leica公司)，SEM(美國Amary公司)，24及96孔培養(yǎng)板(美國Coring公司)。
1.2 方法
(1)構(gòu)建GFP標記的PAO1菌株 采取電轉(zhuǎn)化對PAO1進行GFP)標記。首先制備感受態(tài)PAO1，然后進行菌株pGFPuv質(zhì)粒轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化菌株篩選，提取轉(zhuǎn)化菌株中質(zhì)粒和轉(zhuǎn)化菌株中質(zhì)粒雙酶切電泳鑒定，檢測轉(zhuǎn)化菌株中質(zhì)粒穩(wěn)定性。本實驗獲得較穩(wěn)定遺傳的GFP標記的PAO1菌株。
(2)環(huán)丙沙星最低抑菌濃度(MIC)的測定 采用微量稀釋法測定環(huán)丙沙星對銅綠假單胞菌的MIC，質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853。
(3)銅綠假單胞菌BF體外模型的建立 用平板法培養(yǎng)銅綠假單胞菌BF［4］。取隔夜培養(yǎng)的含有銅綠假單胞菌的LB培養(yǎng)液，調(diào)至1.5×108CFU/ml。分別吸取菌液1ml加入24孔板(其內(nèi)放8mm×8mm玻片)，0.1ml加入96孔板。37℃培養(yǎng)，每48h換液一次，連續(xù)培養(yǎng)7d，即可形成穩(wěn)定成熟的BF［5］。
(4)銅綠假單胞菌BF形態(tài)的SEM檢測 本部分實驗分為兩組［對照組和鹽酸氨溴索組(濃度3.75mg/ml)］。兩組用平板法培養(yǎng)細菌7d，在24孔板內(nèi)分別加入1ml LB培養(yǎng)基和鹽酸氨溴索，37℃孵育24h后取出，用磷酸緩沖液(phosphate buffer solution，PBS)反復清洗，去除浮游菌。立即用2．5%戊二醛PBS溶液中固定2h，再經(jīng)0.1mol PBS沖洗2次(pH7.2)，30%～100%系列濃度乙醇脫水，經(jīng)50%～100%叔丁醇置換，干燥、離子濺射儀噴金，經(jīng)過SEM觀察銅綠假單胞菌BF微觀形態(tài)。
(5)熒光顯微鏡定性觀察細菌BF內(nèi)活菌數(shù) 本部分實驗分為6組［空白對照組，不同濃度的鹽酸氨溴索作用組(濃度依次為3.75、1.875、0.95、0.49和0.25mg/ml)］。在24孔板加入1ml菌液，平板法培養(yǎng)7d，分別加入1ml上述濃度的鹽酸氨溴索和LB培養(yǎng)基，37℃孵育24h取出，用PBS反復清洗，去除浮游菌，取出玻片，置熒光顯微鏡下觀察。
(6)多功能酶標儀定量分析鹽酸氨溴索與環(huán)丙沙星合用后細菌BF內(nèi)活菌數(shù) 細菌培養(yǎng)7d，棋盤法在96孔板內(nèi)分別加入0.1ml不同濃度的鹽酸氨溴索(濃度依次為3.75、1.875、0.95、0.49、0.25和0mg/ml)和環(huán)丙沙星(濃度依次為4、2、1、1/2、1/4和0MIC)，37℃孵育24h取出，用PBS反復清洗，去除浮游菌，用多功能酶標儀檢測各孔熒光強度。
(7)統(tǒng)計學分析 所有數(shù)據(jù)輸入SPSS11.5統(tǒng)計軟件包，并行正態(tài)性分布檢驗，均符合正態(tài)性分布，后進行方差分析，顯著性水平α=0.05。
2 結(jié)果
2.1 環(huán)丙沙星的MIC測定
環(huán)丙沙星的MIC為1μg/ml。
2.2 SEM觀察銅綠假單胞菌BF形態(tài)
經(jīng)過各組處理后銅綠假單胞菌BF進行SEM觀察可以看出，細菌培養(yǎng)7d后形成成熟的BF。對照組BF在載體表面形成片狀物，周圍有厚薄不均的黏液狀物質(zhì)連接成一大片，其內(nèi)包裹大量細菌;鹽酸氨溴索處理組銅綠假單胞菌BF變得稀疏，結(jié)構(gòu)簡單，僅見少量散在細菌。
2.3 熒光顯微鏡觀察鹽酸氨溴索對成熟BF的影響
預置8mm×8mm玻片的24孔板內(nèi)接種等量的細菌，培養(yǎng)7d后加入不同濃度的鹽酸氨溴索作用24h后取出玻片，洗去浮游菌，振蕩破壞BF，使其內(nèi)細菌游出，置熒光顯微鏡下觀察(×200)，取隨機視野，結(jié)果顯示，隨著濃度的升高，細菌減少；當濃度達到0.5mg/ml時，與生理鹽水對照組大致相當。
2.4 多功能酶標儀定量檢測BF內(nèi)活菌熒光強度
隨著鹽酸氨溴索濃度的升高，培養(yǎng)板內(nèi)細菌的熒光強度下降，說明BF內(nèi)活菌減少，統(tǒng)計分析顯示當鹽酸氨溴索濃度達到0.49mg/ml時，與對照組存在差異(單因素方差分析，P
鹽酸氨溴索單獨以及與環(huán)丙沙星聯(lián)用后BF內(nèi)細菌熒光強度圖1中6條曲線代表不同濃度的鹽酸氨溴索作用下，在環(huán)丙沙星濃度從0～8MIC變化時熒光強度的變化趨勢。從圖中可以看出，鹽酸氨溴索與環(huán)丙沙星存在協(xié)同作用(隨著鹽酸氨溴索濃度升高，在同一環(huán)丙沙星濃度所對應的熒光強度，隨之降低)，且隨著鹽酸氨溴索濃度升高，協(xié)同作用增強。
3 討論
近年來由呼吸機輔助通氣的使用增加，導管相關(guān)性感染問題日益突出。銅綠假單胞菌是常見的形成BF菌類之一，形成BF后，由于其滲透限制作用［1］，以及其內(nèi)細菌所處的微環(huán)境改變［5］等原因，導致細菌耐藥性增強，難以清除。盡管國外有報道鹵代呋喃唑酮［6］及藻酸鹽抗體［7］等有破壞BF的作用，但尚未應用于臨床治療，因此，尋找一種有效可行抗銅綠假單胞菌BF的臨床用藥具有極為重要的意義。國外報道，化痰藥N-乙酰半胱氨酸干擾生物膜形成［8］，鹽酸氨溴索作為一種臨床常用的化痰藥與N-乙酰半胱氨酸作用機制上有一定的相似性，推測鹽酸氨溴索可能具有抗BF作用。本文將攜帶GFP的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PAO1，構(gòu)建銅綠假單胞菌發(fā)光菌株，采用平板培養(yǎng)法，7d后得到成熟的BF。SEM觀察顯示，在鹽酸氨溴索的作用下，成熟的BF變得稀疏，不規(guī)則，說明一定濃度的鹽酸氨溴索可影響B(tài)F的形態(tài)，破壞其結(jié)構(gòu)的完整性。同時采用生物發(fā)光法直觀地觀察鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF內(nèi)活菌的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著鹽酸氨溴索濃度的升高，BF內(nèi)黏附的活菌減少，說明鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF有破壞作用。臨床上常用抗生素如環(huán)丙沙星對BF狀態(tài)的銅綠假單胞菌的殺滅作用不強。用多功能酶標儀檢測不同濃度環(huán)丙沙星與鹽酸氨溴索聯(lián)合應用的對細菌的作用，結(jié)果顯示它們具有協(xié)同抑制作用，且隨著鹽酸氨溴索濃度升高，協(xié)同作用增強，BF內(nèi)活菌進一步減少，環(huán)丙沙星的殺菌活性增強。這可能與鹽酸氨溴索破壞BF結(jié)構(gòu)的完整性，增強了環(huán)丙沙星對BF的穿透能力，提高了環(huán)丙沙星對BF中細菌的殺滅能力。由此認為，鹽酸氨溴索對銅綠假單胞菌BF有破壞作用，與其他抗生素聯(lián)用可以提高其殺菌能力，為鹽酸氨溴索的抗BF應用提供了理論基礎，為新生兒難治性銅綠假單胞菌感染的臨床治療提供新的思路。對于鹽酸氨溴索抗BF的作用推測可能與其對BF胞外基質(zhì)的合成和結(jié)構(gòu)維持的影響有關(guān)，具體機制還有待進一步研究。
參考文獻
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方法：2010年1月—2011年10月來我院治療的患者進行跟蹤治療分析，分別對其進行保守治療和單純修補術(shù)后加潰瘍正規(guī)治療兩種方法，前者為對照組，后者為治療組。4周后對患者進行隨訪，將兩組患者的痊愈程度進行統(tǒng)計，并將統(tǒng)計結(jié)果使用SPSS統(tǒng)計學軟件進行X2檢驗，α=0.05。
結(jié)果：對照組的治愈率為81.63%，治療組的治愈率為97.01%。
結(jié)論：單純修補術(shù)后加正規(guī)療法的療效優(yōu)于保守治療，是治療胃、十二指腸急性穿孔性潰瘍的有效方法。
關(guān)鍵詞：胃、十二指腸潰瘍 急性穿孔 保守治療 單純修補術(shù) 臨床研究
【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】A 【文章編號】1008-1879（2012）09-0004-01
胃、十二指腸潰瘍是消化自身胃黏膜所致。疾病產(chǎn)生的主要原因是胃酸和胃蛋白酶?，F(xiàn)代醫(yī)學普遍認可是胃彎曲桿菌感染所導致的潰瘍[1]。臨床上，胃潰瘍發(fā)病率低于十二指腸潰瘍，是臨床上常見的疾病。二者復合型疾病的發(fā)病率在5%左右。胃、十二指腸潰瘍合并急性穿孔是嚴重的急腹癥，如果治療不及時，危及生命。在胃、十二指腸潰瘍急性穿孔的治療方法上本院主要針對保守治療加潰瘍正規(guī)療法和單純修補術(shù)后加潰瘍正規(guī)療法進行臨床分析。
1 臨床資料與方法
1.1 臨床資料。2010年1月—2011年10月來我院治療的胃、十二指腸潰瘍患者116例，其中胃潰瘍穿孔患者45例，十二指腸潰瘍穿孔患者68例，胃、十二指腸復合潰瘍穿孔者3例。男性93例，女性18例，平均年齡45歲，年齡范圍14—53歲。在臨床上患者在經(jīng)過胃鏡檢查，組織切片HP呈陽性，尿素酶實驗陽性?；颊叩谋憩F(xiàn)大同小異，均有腹痛，其中32例腹腔積液、29例檢查出游離氣體。將116例患者分成兩組，對照組和治療組。兩組患者在身高、年齡、體重、性別方面在數(shù)學統(tǒng)計學上無明顯差異（P>0.05）。
1.2 臨床方法。
1.2.1 臨床治療方法。對照組患者49例，采用保守治療，患者在治療前禁飲食，留置胃管進行胃腸減壓，給予患者甲硝唑0.2g/次，3次/天，口服奧美拉唑膠囊20mg/次，1次/天，連續(xù)服用枸櫞酸鉍鉀0.23g/次。2次/天，在此期間靜脈補充營養(yǎng)及體液。治療組患者67例，采用單純修補術(shù)，患者采用頭高腳低位，實施硬脊膜外阻滯麻醉方法，在患者的右上腹部切口，清除腹腔積液以及胃病變溢出物質(zhì)，分離粘連部位，找出穿孔位置，進行常規(guī)取活檢。用可惜首先進行切口縫合，用大腹膜覆蓋。最后用常溫的生理鹽水沖洗腹腔。術(shù)后靜脈注射奧美拉唑54mg/天。待患者能正常進食時，對患者采用三聯(lián)清除方案對幽門螺旋桿菌進行清除，即：奧美拉唑、克拉霉素、阿司匹林聯(lián)合清除，一周為一療程。每組患者連續(xù)治療4周，四周后對每組患者進行隨訪，并統(tǒng)計每一位患者的康復狀況。
1.2.2 統(tǒng)計學方法。將每組患者的康復結(jié)果進行統(tǒng)計，并將統(tǒng)計結(jié)果使用SPSS統(tǒng)計學軟件進行X2檢驗，以P
1.2.3 療效評價。患者在停藥后4周進行胃鏡復查，以潰瘍愈合情況為指標進行統(tǒng)計學分析。痊愈：潰瘍?nèi)?；有效：潰瘍面積縮小50%；無效：潰瘍愈合面積縮小在50%以下，偶有輕微疼痛。
2 結(jié)果
2.1 臨床治療結(jié)果。116例患者在我院接受治療后，對照組49例，治愈32例，有效21例，無效0例，治愈率為81.63%；治療組患者67例，治愈58例，有效9例，無效0例，治愈率為97.01%。詳細結(jié)果見表1。
2.2 統(tǒng)計學結(jié)果。將兩組患者的治療結(jié)果使用SPSS統(tǒng)計學軟件進行X2檢驗得出P
3 討論
3.1 胃、十二指腸潰瘍的發(fā)病因素很多，胃酸和胃蛋白酶是消化性潰瘍的主要的原因。胃酸分泌過多、幽門螺旋桿菌感染（HP）、胃粘膜保護薄弱、膽汁反流和胃排空延緩、藥物因素、精神因素軍事胃、十二指腸潰瘍的發(fā)病原因[2]。在單因素或多因素的作用下胃粘膜的自我保護和地域能力降低，在在治療上，臨床多采用保守治療、單純穿孔修補術(shù)、穿孔修補加高選迷走神經(jīng)切除術(shù)、一期胃大部分切除術(shù)等先進的治療方法。
3.2 本次臨床研究116例患者的治愈率為100%，單純修補術(shù)加潰瘍正規(guī)治療方法優(yōu)于保守治療，保守治療是通過藥物控制胃酸的分泌，根據(jù)潰瘍的大小、胃酸分泌情況，在患者潰瘍面積稍小的基礎上進行此方法的治療，本院使用的奧美拉唑是質(zhì)子泵抑制劑，是目前抑制胃酸最強的藥物。單純穿孔修補術(shù)操作簡單，創(chuàng)傷小，是至今廣泛應用的治療方法，在本次臨床研究中的痊愈率達到97.01%。具有一定的臨床應用價值。
3.3 目前隨著醫(yī)療器械的發(fā)展，腹腔鏡在應用胃、十二指腸潰瘍穿孔治療上也很普遍，馬飛國，喬鳳磊認為腹腔鏡在術(shù)中應用可以減少出血量和縮短胃功能的回復時間[3]。治療胃、十二指腸潰瘍穿孔的方法甚多，在選擇方面至關(guān)重要。醫(yī)生應根據(jù)患者的具體病情進行相應的治療。
參考文獻
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