摘要：為了闡明水稻膜聯(lián)蛋白基因家族成員OsAnn8在干旱和低溫脅迫條件下的功能作用機(jī)制,通過熒光定量PCR技術(shù)對(duì)不同干旱和低溫處理下的水稻葉片中OsAnn8基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄水平上的定量分析,結(jié)果表明,OsAnn8基因在干旱脅迫處理前后表達(dá)量呈現(xiàn)出高-低-高的變化趨勢(shì),而在冷脅迫處理前后表達(dá)量則呈現(xiàn)出低-高-低-低的變化。隨后,利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)對(duì)OsAnn8基因進(jìn)行定點(diǎn)編輯,并借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)將OsAnn8基因靶位點(diǎn)的CRISPR/Cas9基因編輯植物表達(dá)載體導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因受體品種TP309,經(jīng)潮霉素篩選后共獲得32株轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株,靶位點(diǎn)擴(kuò)增測(cè)序峰圖分析表明其中的2個(gè)單株出現(xiàn)了重疊峰,進(jìn)一步的T載體克隆分別測(cè)序表明,這2個(gè)單株為單等位基因敲除,說明本研究已經(jīng)成功獲得了OsAnn8基因靶位點(diǎn)敲除的單等位突變體,不同類型的水稻OsAnn8基因突變體的創(chuàng)建,為水稻膜聯(lián)蛋白基因家族成員OsAnn8在非生物脅迫條件下的功能研究奠定了材料基礎(chǔ)。