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四氫噻吩-3-酮還原酶的篩選與表征

作者:嚴(yán)陽; 郁惠蕾; 潘江; 許建和 華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 生物催化與合成生物技術(shù)研究室; 上海200237

摘要:通過基因挖掘技術(shù)獲得一種來源于炭疽芽胞桿菌的短鏈脫氫酶BaCR1。它能夠催化四氫噻吩-3-酮的不對稱還原反應(yīng),進(jìn)而合成碳青霉烯類抗生素硫培南的重要手性中間體(R)-四氫噻吩-3-醇。對BaCR1進(jìn)行了催化性能表征,結(jié)果表明最適反應(yīng)pH為7.0,最適反應(yīng)溫度為30℃,催化劑轉(zhuǎn)化數(shù)(kcat)與米氏常數(shù)(KM)之比(kcat/KM)為0.25L/(mmol·s)。在100mL的反應(yīng)體系中,偶聯(lián)葡萄糖脫氫酶用于輔酶再生,在底物上載量為50mmol/L、重組大腸桿菌整細(xì)胞(干重)上載量為20g/L的條件下,無需額外添加輔因子NADPH,反應(yīng)24h,轉(zhuǎn)化率大于99%,還原產(chǎn)物的e.e.值為84%,實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)物的克級制備,體現(xiàn)了酶法不對稱還原制備(R)-四氫噻吩-3-醇的潛力。

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華東理工大學(xué)學(xué)報·社會科學(xué)版

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