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鴿骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及成肌特性

作者:林正浩; 王訊; 李曉開; 羅毅 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院畜禽遺傳資源發(fā)掘與創(chuàng)新利用四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 四川成都611130

摘要:【目的】探討白羽王鴿Columba livia骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定的方法,建立完整的家鴿骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的培養(yǎng)體系?!痉椒ā窟x擇孵化16d的鴿胚作為試驗(yàn)材料,采用組織塊貼壁法和膠原酶消化法分離胸肌的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞并繪制其生長(zhǎng)曲線。待衛(wèi)星細(xì)胞分化出肌管后,采用免疫熒光法檢測(cè)肌球蛋白重鏈(MyHC)的表達(dá);在細(xì)胞分化出肌管前、后分別提取總RNA,采用RT-qPCR方法檢測(cè)Desmin、Pax7、MyoG和MyoD1基因在細(xì)胞分化出肌管前、后的相對(duì)表達(dá)量?!窘Y(jié)果】組織塊貼壁法和膠原酶法均能成功地分離出骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,其生長(zhǎng)曲線呈“S”型;該細(xì)胞經(jīng)含體積分?jǐn)?shù)為20%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)7d后視野中出現(xiàn)大量明顯可見(jiàn)的肌管,成肌特異性標(biāo)志MyHC表達(dá)呈陽(yáng)性。RT-qPCR結(jié)果表明,Desmin和MyoG基因分化后的相對(duì)表達(dá)量分別是分化前的5.68和10.38倍,而Pax7和MyoD1基因分化前的相對(duì)表達(dá)量分別是分化后的7.01和5.51倍?!窘Y(jié)論】建立了鴿骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的培養(yǎng)體系,為今后進(jìn)行家鴿肌肉發(fā)育的研究提供細(xì)胞模型。

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