摘要:為了探究燦爛弧菌中Zn2+轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的細(xì)胞周質(zhì)組分Vs A的表達(dá)與功能,本實(shí)驗(yàn)采用PCR克隆vsA基因,實(shí)時(shí)熒光定量測(cè)定vsA基因的表達(dá),利用抗體封閉實(shí)驗(yàn)研究Vs A蛋白的功能。生物信息學(xué)分析表明Vs A具有結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)Zn2+的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果表明,vsA的表達(dá)受Zn2+調(diào)控,且具有濃度依賴性,0.01 mmol/L的Zn2+可使vsA的表達(dá)量下調(diào)至對(duì)照組的0.5倍,而添加等摩爾量的Cu2+、Fe3+、Mg2+和Ca2+對(duì)vsA的表達(dá)無(wú)明顯影響。而0.1μmol/L Zn2+則會(huì)誘導(dǎo)vsA的表達(dá)。此外,在大腸桿菌Escherichia coli BL21 (DE3)中進(jìn)行了Vs A的重組表達(dá),制備了Vs A的小鼠多克隆抗體。利用抗體封閉Vs A蛋白可導(dǎo)致?tīng)N爛弧菌在Zn2+限制條件下的生長(zhǎng)受抑制,以及過(guò)氧化氫的能力和粘附效率的降低。本研究獲得了燦爛弧菌的vsA基因,其表達(dá)受Zn2+濃度調(diào)控,Vs A蛋白在燦爛弧菌生長(zhǎng)、抗氧化以及粘附宿主細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮作用。
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