摘要：簡(jiǎn)單異尖線蟲復(fù)合種(Anisakis simplex species complex)是人獸共患寄生蟲,其中的簡(jiǎn)單異尖線蟲(A. simplex sensu stricto)和派氏異尖線蟲(A. pegreffii)能引起人異尖線蟲病。本研究利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)結(jié)合流動(dòng)試紙條(lateral flow dipstick,LFD)建立了簡(jiǎn)單異尖線蟲/派氏異尖線蟲的快檢技術(shù)。本研究以簡(jiǎn)單異尖線蟲核糖體DNA 的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ribosomal internal transcribed spacer 2, rDNA-ITS2)序列為檢測(cè)靶標(biāo),設(shè)計(jì)6條特異性的引物進(jìn)行(熒光)LAMP 反應(yīng)。將生物素化的LAMP 產(chǎn)物與異硫氰酸熒光素標(biāo)記的探針雜交并通過(guò)LFD 可視化顯示。結(jié)果表明,本研究建立的LAMP-LFD 可以特異性檢測(cè)出簡(jiǎn)單異尖線蟲/派氏異尖線蟲,而對(duì)其它10 種蠕蟲的檢測(cè)結(jié)果呈陰性;針對(duì)兩個(gè)異尖線蟲姊妹種的第三期幼蟲(third-stage larvae, L3)的檢測(cè)靈敏度為單條蟲體基因組DNA 的10^5 倍。優(yōu)化后的LAMP 反應(yīng)時(shí)間為40min,加之探針雜交和LFD 顯色,整個(gè)檢測(cè)時(shí)程只需50min。利用本LAMP-LFD 方法對(duì)2015—2017 年收集于140 尾海魚的1573 條線蟲進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果表明,簡(jiǎn)單異尖線蟲/派氏異尖線蟲是東海海域的優(yōu)勢(shì)種,這與經(jīng)rDNA-ITS1-5.8S-ITS2 測(cè)序的結(jié)果一致。因此, LAMP-LFD 方法能快速、靈敏且準(zhǔn)確地檢測(cè)簡(jiǎn)單異尖線蟲/派氏異尖線,在經(jīng)濟(jì)魚類中簡(jiǎn)單異尖線蟲復(fù)合種的篩檢和常規(guī)檢驗(yàn)檢疫具有巨大潛力。