摘要：目的利用綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記人細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1),觀察GFP是否影響ICAM-1在細(xì)胞膜表面的定位,實(shí)現(xiàn)ICAM-1可視化。應(yīng)用原子力顯微鏡(AFM)單分子力譜研究ICAM-1/CD11b相互作用,并探討瑞舒伐他汀(RSV)及單抗類藥物干預(yù)的影響。方法從人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中提取總RNA,設(shè)計(jì)合成PCR引物(兩端分別含有Bam HⅠ、HindⅢ特異性酶切位點(diǎn)),使用RT-PCR擴(kuò)增獲取ICAM-1cDNA編碼區(qū)序列,經(jīng)測(cè)序分析篩選正確序列,與pEGFP-N1表達(dá)載體相接,即得到基于GFP的重組質(zhì)粒pICAM-1-GFP,脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,通過熒光顯微鏡觀察融合蛋白pICAM-1-GFP在COS-7上的定位。AFM單分子力譜測(cè)量該細(xì)胞模型上單對(duì)黏附分子ICAM-1/CD11b的相互作用力值,應(yīng)用RSV及抗ICAM-1單克隆抗體干預(yù),檢測(cè)黏附力值是否有變化。結(jié)果序列分析RT-PCR擴(kuò)增獲得的片段為人ICAM-1的cDNA編碼區(qū),pICAM-1-GFP發(fā)出綠色熒光定位于COS-7細(xì)胞表面。單對(duì)黏附分子ICAM-1/CD11b的相互作用力值約為42pN,RSV干預(yù)對(duì)此值無明顯影響,而抗ICAM-1單克隆抗體則有效降低了此單對(duì)黏附分子親和力。結(jié)論熒光蛋白GFP能融合于ICAM-1的C端,且不影響ICAM-1在COS-7細(xì)胞膜表面的定位表達(dá)。RSV不能通過直接阻斷單分子ICAM-1或CD11b影響其相互作用,可能是通過有效抑制ICAM-1表達(dá)量的增加從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化炎癥進(jìn)程作用?？笽CAM-1單克隆抗體有效降低黏附分子親和力,提示單抗類藥物在抗炎治療領(lǐng)域的應(yīng)用前景。該研究建立的方法模型可作為活細(xì)胞體系探討單對(duì)黏附分子親和力及藥物干預(yù)影響的重要研究手段。