摘要：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立CYP2C19*2、*3和*17基因多態(tài)性PCR反應(yīng)體系和條件,篩選出4μL體系中各因素最佳水平。采用SNaPshot技術(shù)對(duì)CYP2C19基因3個(gè)SNP位點(diǎn)*2、*3和*17同時(shí)進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè),利用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)影響PCR反應(yīng)體系和條件的3個(gè)因素(PCR Mix, Taq DNA聚合酶,循環(huán)次數(shù))在3個(gè)水平上進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果采用綜合評(píng)分法和極差分析法進(jìn)行分析。用3組已知樣本對(duì)正交優(yōu)化所得條件進(jìn)行重復(fù)性和穩(wěn)定性驗(yàn)證。結(jié)果表明CYP2C19*2、*3和*17基因PCR擴(kuò)增體系的影響因素依次為:PCR Mix>循環(huán)數(shù)>Taq DNA聚合酶。最佳反應(yīng)體系為PCR Mix 2.0μL、Taq DNA聚合酶0.2μL、循環(huán)次數(shù)32次。3組樣本驗(yàn)證效果滿意。優(yōu)化的CYP2C19*2、*3和*17基因PCR反應(yīng)體系穩(wěn)定性高,重復(fù)性和經(jīng)濟(jì)性較好,為該基因多態(tài)性的大規(guī)模調(diào)查奠定了基礎(chǔ)。