摘要：【目的】Toll信號通路是昆蟲天然免疫系統(tǒng)的重要組分,其中Toll受體在激活昆蟲病原菌侵染免疫應(yīng)答方面發(fā)揮了關(guān)鍵作用。本研究旨在探究斯氏按蚊Anopheles stephensi Toll受體基因在抵抗微生物侵染和維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)過程中的功能?！痉椒ā扛鶕?jù)岡比亞按蚊Anopheles gambiae Toll受體家族的蛋白氨基酸序列,通過序列同源比對鑒定斯氏按蚊中相應(yīng)的Toll受體基因;運(yùn)用熒光定量PCR檢測Toll受體基因在未感染病原菌的斯氏按蚊脂肪體中的相對表達(dá)量,以及在真菌球孢白僵菌Beauveria bassiana和革蘭氏陰性細(xì)菌胡蘿卜軟腐歐文氏菌Erwinia carotovora subsp.carotovora侵染斯氏按蚊過程中的表達(dá)變化;最后,在斯氏按蚊雌成蚊胸部顯微注射AsToll1A和AsToll5A的雙鏈RNA進(jìn)行RNA干擾后,檢測RNAi處理的斯氏按蚊受真菌侵染后的存活率、腸道細(xì)菌含量變化以及抗菌肽基因表達(dá)變化?！窘Y(jié)果】在斯氏按蚊中共鑒定到8個Toll受體基因,即AsToll1A,AsToll5A,AsToll6,AsToll7,AsToll8,AsToll9,AsToll10和AsToll11。通過熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),未感染病原菌的斯氏按蚊雌成蚊脂肪體中AsToll5A表達(dá)量最高,AsToll1A表達(dá)量次之,其余Toll受體基因表達(dá)量極低。在球孢白僵菌和胡蘿卜軟腐歐文氏菌侵染過程中,與對照(注射PBS)比較,AsToll1A和AsToll5A在斯氏按蚊中的表達(dá)量顯著升高,其余Toll受體基因表達(dá)變化不顯著或降低。RNA干擾結(jié)果表明,AsToll1A或AsToll5A的表達(dá)受到抑制后,斯氏按蚊對球孢白僵菌的抵抗能力顯著降低,腸道細(xì)菌總量與對照(dsGFP)比較顯著增多。而且,抑制AsToll1A后抗菌肽基因DEF1和GAM1的表達(dá)受到顯著抑制;抑制AsToll5A后僅有GAM1表達(dá)量下調(diào)。【結(jié)論】斯氏按蚊Toll受體在結(jié)構(gòu)和功能上具有高度的保守性,其中AsToll1A和AsToll5A能響應(yīng)病原真菌和革蘭氏陰性細(xì)菌侵染并且影響腸道菌穩(wěn)態(tài)。