摘要：為探討中國(guó)綠水螅(Hydra sinensis)抗壞血酸過(guò)氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中國(guó)綠水螅APX基因的全長(zhǎng)cDNA序列。該cDNA序列總長(zhǎng)1357 bp,包括5′非編碼區(qū)107 bp,3′非編碼區(qū)146 bp及開(kāi)放閱讀框(Open reading frame,ORF)1104 bp,共編碼367個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)分子量為40.79 kD。BLAST結(jié)果表明中國(guó)綠水螅APX蛋白同源序列絕大部分來(lái)自植物界;通過(guò)最大似然法(Maximum-likelihood)和貝葉斯分析(Bayesian inference)進(jìn)行的系統(tǒng)發(fā)生分析顯示植物界及動(dòng)物界物種的APX序列各自形成單系群。把APX基因ORF全長(zhǎng)序列克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒pET-GST中,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG誘導(dǎo)后成功表達(dá)重組融合蛋白GST-APX,再使用純化的重組蛋白免疫新西蘭兔制備多克隆抗體用于APX蛋白的免疫印跡分析(Western blotting assay,WB)。在不同光照時(shí)長(zhǎng)梯度(光強(qiáng)度2000 lx,每天分別光照0、4h、8h、12h、16h、20h及24h)下培養(yǎng)中國(guó)綠水螅30d,實(shí)時(shí)定量PCR(Quantitative real-timePCR,qPCR)及WB檢測(cè)結(jié)果均表明光照時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)(每天光照12h以上)綠水螅APX表達(dá)呈現(xiàn)一定程度的上調(diào)。在長(zhǎng)時(shí)間光輻射下水螅體內(nèi)共生綠藻連續(xù)進(jìn)行光合作用所累積的大量活性氧能夠擴(kuò)散到水螅細(xì)胞內(nèi),此時(shí)水螅體內(nèi)表達(dá)上調(diào)的APX可能參與清除其細(xì)胞內(nèi)的活性氧。