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翹嘴鲌胰島素樣生長因子-Ⅰ的克隆及序列分析

作者:劉士力; 程順; 蔣文枰; 遲美麗; 鄭建波; 賈永義; 趙金良; 顧志敏 浙江省淡水水產(chǎn)研究所; 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水漁業(yè)健康養(yǎng)殖重點實驗室/浙江省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點實驗室; 湖州313001; 上海海洋大學(xué); 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點實驗室; 上海201306

摘要:為探討胰島素樣生長因子-Ⅰ(Insulin like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)對于翹嘴鲌(Culter alburnus)生長性狀的影響,對其DNA序列進(jìn)行了克隆。翹嘴鲌IGF-Ⅰ全長14567 bp,由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成。其5個外顯子長度分別為298、160、182、36和1360 bp。推測的閱讀框為486 bp,編碼由161個氨基酸組成的IGF-Ⅰ前體蛋白。前體肽由信號肽、成熟肽、E肽三部分組成,其中信號肽44個氨基酸,成熟肽70個氨基酸,E肽47個氨基酸。成熟肽由B、C、A、D四個區(qū)域組成,其中B結(jié)構(gòu)域和A結(jié)構(gòu)域的保守性最高,在這2個區(qū)域包含由6個半胱氨酸殘基形成的3個二硫鍵。翹嘴鲌B區(qū)域還包含保守的IGF-Ⅰ受體識別序列(PheB23-TyrB24-PheB25)。E肽的長度表明翹嘴鲌IGF-Ⅰ屬Ea-2型。同源性分析表明翹嘴鲌與鯉科魚類的IGF-Ⅰ編碼氨基酸同源性較高,為94%-100%,但在聚類分析中翹嘴鲌并不是首先和鲌亞科的魚類聚集在一起。Real-time qPCR組織特異性表達(dá)結(jié)果顯示IGF-ⅠmRNA在肝臟組織中的表達(dá)量最高,脾、心臟、精巢、腦次之,腎、鰓、胃和卵巢中表達(dá)量較低。翹嘴鲌IGF-Ⅰ基因4個內(nèi)含子長度分別為1170、9364、251和1746 bp。相對外顯子來說,種間內(nèi)含子變異較大,其中第三內(nèi)含子變異最大。翹嘴鲌IGF-Ⅰ基因中包含6個微衛(wèi)星,(GATG)5AATAT(ATAG)11位于第一內(nèi)含子中,(CT)8、(TTA)5、(AC)13、(TG)12和(ATT)5位于第二內(nèi)含子中。其中4個微衛(wèi)星位點具有多態(tài)性,將它們在120尾同塘養(yǎng)殖的翹嘴鲌中進(jìn)行基因型與生長性狀的關(guān)聯(lián)性分析,均未達(dá)到顯著水平(P>0.05)。結(jié)果為進(jìn)一步研究該基因的表達(dá)、功能及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控特征奠定了分子基礎(chǔ)。

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