摘要：酪氨酸是三大芳香族氨基酸之一,廣泛用于食品、醫(yī)藥和化工等領(lǐng)域。轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)工程為代謝工程改造大腸桿菌選育酪氨酸生產(chǎn)菌株提供了一種重要的研究策略。大腸桿菌中酪氨酸胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)主要通過(guò)aroP和tyrP基因編碼的通透酶進(jìn)行調(diào)控。以酪氨酸生產(chǎn)菌株HGXP為出發(fā)菌株,利用CRISPR-Cas9技術(shù)成功構(gòu)建了aroP和tyrP基因敲除菌,并通過(guò)發(fā)酵試驗(yàn)考察了調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)對(duì)酪氨酸生產(chǎn)的影響。發(fā)酵結(jié)果表明,aroP和tyrP基因敲除菌酪氨酸產(chǎn)量分別達(dá)到3.74 g/L和3.45 g/L,較出發(fā)菌株酪氨酸產(chǎn)量分別提高了19%和10%。對(duì)誘導(dǎo)溫度進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表明38℃為最佳誘導(dǎo)溫度。在3 L發(fā)酵罐上進(jìn)行了補(bǔ)料分批發(fā)酵,aroP和tyrP基因敲除菌酪氨酸產(chǎn)量進(jìn)一步提高至44.5 g/L和35.1 g/L,較出發(fā)菌株酪氨酸產(chǎn)量分別提高了57%和24%。研究結(jié)果對(duì)代謝工程強(qiáng)化大腸桿菌生產(chǎn)酪氨酸具有重要的參考價(jià)值。