腦心肌炎病毒pCMV-HA-VP2表達載體的構(gòu)建及在HEK293細胞中的表達
作者：李倩; 李向茸; 王興隴; 馬瑞仙; 李生軍; 馮若飛 西北民族大學生物工程與技術(shù)國家民委重點實驗室; 甘肅蘭州730030; 甘肅省動物細胞工程技術(shù)研究中心; 甘肅蘭州730030; 西北民族大學生命科學與工程學院; 甘肅蘭州730030
摘要：目的:構(gòu)建腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditis Virus,EMCV)衣殼蛋白VP2基因的真核表達載體pCMV-HA-VP2,并在HEK293細胞中表達.方法:提取EMCV的總RNA,RT-PCR擴增VP2基因,酶切后構(gòu)建帶HA標簽的真核表達質(zhì)粒pCMV-HA-VP2,運用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)染至HEK293細胞中,分別進行過表達檢測、Western-blotting分析及IFA檢測來驗證VP2基因的轉(zhuǎn)錄及表達情況.結(jié)果:重組表達載體pCMV-HA-VP2構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染至HEK293細胞中,VP2蛋白和HA標簽融合表達成功.結(jié)論:EMCV衣殼蛋白VP2基因的真核表達載體pCMV-HA-VP2在HEK293細胞中的成功表達,為EMCV衣殼蛋白的功能研究提供理想的實驗材料,同時也為EMCV感染機制及其受體研究奠定基礎(chǔ).
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