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馬鈴薯StmiR166b靶基因的鑒定及其表達(dá)分析

作者:武亮亮; 張寧; 朱熙; 馬瑞; 唐勛; 楊江偉; 司懷軍 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院; 甘肅省干旱生境作物學(xué)省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地; 蘭州730070; 青海省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所; 西寧810001

摘要:為闡明馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)StmiR166b的生物學(xué)功能,以栽培品種‘甘農(nóng)薯2號(hào)’試管苗為試驗(yàn)材料,采用定量PCR技術(shù)檢測(cè)StmiR166b及其靶基因StHB14、StHB15在不同組織中的差異表達(dá);利用pRS300質(zhì)粒為模板,通過over-lapping PCR技術(shù)克隆了包含StmiR166b-StmiR166b^*成熟體序列的前體結(jié)構(gòu),構(gòu)建了其人工表達(dá)載體,通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化馬鈴薯獲得了轉(zhuǎn)基因植株。結(jié)果表明,StmiR166b及其靶基因StHB14和StHB15在馬鈴薯根、莖和葉中均有表達(dá),在轉(zhuǎn)基因株系L1、L3中靶基因不同程度地下調(diào)表達(dá);與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ障啾?轉(zhuǎn)基因株系的株高和根長(zhǎng)變短,生長(zhǎng)受到抑制。

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