摘要：目的建立成年狨猴腎臟細(xì)胞體外培養(yǎng)的培養(yǎng)體系,并將Cas9編輯系統(tǒng)初步應(yīng)用于所培養(yǎng)的狨猴腎臟細(xì)胞,建立檢測(cè)sgRNA切割活性的體系。方法取成年的狨猴腎臟,采用貼壁法、消化法得到狨猴腎臟細(xì)胞。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行生長(zhǎng)曲線測(cè)定、轉(zhuǎn)染試劑(Viafect和Lipo2000)及抗性(嘌呤霉素和殺稻瘟菌素)濃度篩選,將SIRT1的sgRNA質(zhì)粒和Cas9質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染狨猴細(xì)胞,提取基因組并對(duì)基因修飾目的片段擴(kuò)增,并將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。結(jié)果建立狨猴腎臟細(xì)胞體外培養(yǎng)體系;ViaFect轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染率大于60%;細(xì)胞抗性篩選適宜濃度嘌呤霉素4μg/mL,殺稻瘟菌素8μg/mL;測(cè)序結(jié)果表明,從sgRNA的PAM序列附近開(kāi)始出現(xiàn)突變峰,證明sgRNA成功引入突變。結(jié)論成功建立了狨猴腎臟細(xì)胞的體外培養(yǎng)、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和抗性篩選體系;CRISPR/Cas9可以用于狨猴腎臟細(xì)胞編輯,為基因修飾狨猴靶點(diǎn)選擇提供依據(jù)。