摘要：目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌Rv1787基因的原核表達質(zhì)粒進行體外表達,運用生物學信息分析方法分析Rv1787基因編碼蛋白PPE25的生物學特征。 方法以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組DNA為模板,PCR法擴增Rv1787基因,并與表達載體pET-32a構(gòu)建重組質(zhì)粒。原核表達重組質(zhì)粒,SDS-PAGE分析表達產(chǎn)物并利用親和層析的方法進行純化。利用生物信息學軟件ProtParam分析PPE25蛋白的理化性質(zhì),TMPRED和SignalP4.1Service預(yù)測蛋白的跨膜區(qū)和信號肽,NPS@SOPMA和Swissmodel分別預(yù)測蛋白的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu),Bepipred 1.0bserver和DNAStar綜合預(yù)測蛋白的B細胞抗原表位,綜合運用SYFPEITHI、BIMAS、NetCTL、RANKPEP、NetMHCⅡPAN 4.0server預(yù)測蛋白的CTL細胞表位,綜合運用SYFPEITHI、RANKPEP、NetMHCⅡpan 3.2server預(yù)測蛋白的Th細胞表位。 結(jié)果pET-32a-Rv1787重組質(zhì)粒測序結(jié)果與目的基因完全一致;SDS-PAGE分析表明,該融合蛋白以包涵體形式存在,相對分子質(zhì)量為56×10^3,與預(yù)期大小相符。生物信息學分析結(jié)果顯示,PPE25蛋白為疏水性蛋白,含多個跨膜結(jié)構(gòu)域,無信號肽。二級結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋和無規(guī)則卷曲構(gòu)成,結(jié)構(gòu)比較松散。綜合多種表位預(yù)測軟件分析結(jié)果,篩選出3個優(yōu)勢B細胞抗原表位,7個CTL優(yōu)勢抗原表位和9個Th優(yōu)勢抗原表位。 結(jié)論成功構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌PPE25蛋白編碼基因Rv1787重組原核表達質(zhì)粒,并利用生物信息學篩選出多個優(yōu)勢抗原表位,為進一步研究PPE25蛋白在結(jié)核病發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。