摘要：目的探索乙型腦炎疫苗株包膜蛋白(E蛋白)138位氨基酸向野毒株回復(fù)突變對(duì)其神經(jīng)毒力與神經(jīng)侵襲力的影響。 方法采用重疊延伸PCR技術(shù)擴(kuò)增含有K138E突變位點(diǎn)的DN段,構(gòu)建乙腦疫苗株E蛋白K138E位氨基酸突變的病毒感染性克隆,體外轉(zhuǎn)錄病毒RNA,電轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞拯救病毒,繪制病毒生長(zhǎng)曲線,采用蝕斑試驗(yàn)與測(cè)序鑒定突變病毒,通過動(dòng)物試驗(yàn)評(píng)價(jià)突變病毒與疫苗株對(duì)昆明小鼠的神經(jīng)毒力和神經(jīng)侵襲力。 結(jié)果酶切和測(cè)序表明K138E突變病毒感染性克隆構(gòu)建成功,并通過電轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞包裝得到K138E突變病毒。蝕斑試驗(yàn)顯示突變病毒的蝕斑稍大于疫苗株,兩株病毒的生長(zhǎng)曲線與神經(jīng)侵襲力無明顯不同,但突變病毒神經(jīng)毒力顯著升高。 結(jié)論乙腦疫苗株E138位氨基酸回復(fù)突變后神經(jīng)毒力增強(qiáng),E138位氨基酸是調(diào)控疫苗株神經(jīng)毒力的重要位點(diǎn)。