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豬外周血及骨髓源樹突狀細(xì)胞分化方法的建立

作者:趙文影; 姜一峰; 虞凌雪; 趙款; 朱豪杰; 高飛; 李國新; 張玉嬌; 李麗薇; 周艷君; 劉雪蘭; 童光志 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院; 合肥230036; 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所; 上海200241; 江蘇高校動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心; 揚(yáng)州225009

摘要:本研究對(duì)豬源樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)的分化條件進(jìn)行了摸索,通過對(duì)試驗(yàn)豬只日齡的選擇、刺激物濃度和刺激時(shí)間的比較以及DC表面分子標(biāo)記的選擇,確定了豬外周血和骨髓源DC的分化條件。靜脈采集15日齡豬只抗凝血分離獲得外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),貼壁12h后,用終濃度80ng/mL的GM-CSF和40ng/mL的IL-4共同刺激7d,用CD152作為DC的表面分子標(biāo)志,試驗(yàn)結(jié)果顯示:貼壁的單核細(xì)胞在GM-CSF和IL-4的共同刺激下,7d后能夠?qū)⒊^60%的單核細(xì)胞刺激分化為CD152^+的DC。取15日齡豬只的股骨和脛骨并沖洗骨髓腔,參考外周血來源DC的分化方法,結(jié)果顯示:可以獲得約63%的骨髓源單核細(xì)胞刺激分化為CD152^+的DC。本研究建立的DC分化方法為進(jìn)一步研究病毒感染后豬體建立獲得性免疫應(yīng)答的機(jī)制奠定了平臺(tái)基礎(chǔ)。

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