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田鼠巴貝斯蟲棒狀體蛋白相關(guān)因子1基因的原核表達(dá)及其特性研究

作者:蔣藝佳; 肖雯雯; 聶政; 敖陽思琦; 李慕曉; 何沛; 周金林; 趙俊龍; 賀蘭 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院; 武漢430070; 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所; 上海200241

摘要:本研究以田鼠巴貝斯蟲基因組DNA為模板,擴(kuò)增棒狀體蛋白相關(guān)因子1(rhoptry-associated protein interacting factor1,簡(jiǎn)稱RAPIF1)基因,全長(zhǎng)為771bp,編碼256aa,編碼蛋白的分子質(zhì)量為29kDa。利用多種數(shù)據(jù)庫與生物信息學(xué)分析軟件,對(duì)田鼠巴貝斯蟲RAPIF1進(jìn)行生物信息學(xué)分析,預(yù)測(cè)其親水性/疏水性、跨膜區(qū)、信號(hào)肽、翻譯后修飾位點(diǎn)、B淋巴細(xì)胞抗原表位,結(jié)果預(yù)示RAPIF1具有良好的親水性。將RAPIF1的ORF插入表達(dá)載體pET-28a進(jìn)行原核表達(dá),重組蛋白rRAPIF1大小為37kDa。制備rRAPIF1的多克隆抗體,Westernblot結(jié)果顯示,RAPIF1存在于蟲體中,且rRAPIF1具有良好的反應(yīng)原性,可有效區(qū)分田鼠巴貝斯蟲陽性血清和陰性血清。本研究結(jié)果表明,RAPIF1預(yù)期可作為田鼠巴貝斯蟲檢測(cè)和疫苗制備的候選分子。

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