豬小腸上皮細胞酵母雙雜交cDNA文庫的構建
作者：李慧春; 陳鵬飛; 李先斌; 丁思嘉; 王康; 張文超; 楊德強; 李林; 徐晶晶; 虞凌雪; 姜一峰; 高飛; 于海; 童光志; 周艷君 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所; 上海200241; 上海交通大學農(nóng)業(yè)與生物學院; 上海200240; 江蘇高校動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心; 揚州225009
摘要：豬小腸上皮細胞(intestinal epithelial cell,IECs)是豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主體內(nèi)感染的靶細胞,為了研究PEDV在體內(nèi)與宿主細胞蛋白之間的互作關系以便于揭示其致病機理,本研究以IECs為研究對象,提取了IECs的總RNA,利用SMART技術經(jīng)過反轉錄、擴增和純化獲得雙鏈cDNAs后,將其與pGADT7-Rec和carrierDNA共同轉化至酵母Y187菌株,進行選擇性培養(yǎng)基(SD/-Leu)篩選以及文庫容量及質(zhì)量的鑒定。結果顯示,本研究構建的IECscDNA文庫其庫容量為1.3×10^8pfu/mL,插入cDN段長度為250~2500bp,文庫陽性率達100%。本研究結果表明構建的IECscDNA文庫具有較好的多態(tài)性,為后續(xù)研究PEDV與宿主細胞蛋白之間的互作關系提供了有力支持。
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