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枇杷iPBS分子標記的PCR體系優(yōu)化與引物篩選

作者:顧林平; 張冰; 費艷; 王化坤; 王鵬凱 江蘇省蘇州市吳中區(qū)金庭鎮(zhèn)農林服務站; 江蘇蘇州215119; 江蘇省太湖常綠果樹技術推廣中心; 江蘇蘇州215107; 江蘇省農業(yè)種質資源保護與利用平臺; 南京210014; 蘇州農業(yè)職業(yè)技術學院; 江蘇蘇州215008

摘要:以枇杷的DNA為模板進行iPBS-PCR擴增,采用預備試驗中效果較好的iPBS分子標記引物2241,對枇杷iPBS-PCR反應體系中的dNTP、Mg^2+、引物、模板用量進行優(yōu)化。根據(jù)檢測結果確定枇杷iPBS-PCR使用10×Taq buffer 2μL,25mM Mg^2+1.6μL,2.5mM dNTP 1.6μL,10μmol/L Primer 1μL,5U/μL Taq酶0.2μL,模板DNA 5ng的20μL反應體系。反應程序中的退火溫度可以參考iPBS引物理論Tm值。對33條iPBS引物擴增測試的結果顯示在該反應體系下可以篩選到譜帶清晰、多態(tài)性好的引物22條,可用于枇杷的分子標記分析。

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