摘要：研究構(gòu)建了庫(kù)容量約為1.3×10^4個(gè)克隆子且外源片段的總長(zhǎng)為30Mb的土壤宏基因組文庫(kù)?；诠δ懿呗?從文庫(kù)中篩選到分解木聚糖底物的陽(yáng)性克隆子。該克隆經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)一個(gè)822bp的潛在的編碼木聚糖酶基因(cbxynA)的開(kāi)放閱讀框,其編碼的氨基酸序列與來(lái)自古細(xì)菌屬編碼的木聚糖酶的相似度最高僅為45%,說(shuō)明該序列為一條未知的新序列。cbxynA在大腸桿菌中的重組表達(dá)產(chǎn)物的分子質(zhì)量為29ku,與預(yù)測(cè)結(jié)果一致。對(duì)其原核表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明:質(zhì)粒在培養(yǎng)5h后加入0.7mmol/LIPTG,23℃下誘導(dǎo)25h后表達(dá),木聚糖酶活力為52U/mL,較初始值提高4.3倍。而重組酶(CBXYNA)最適pH和最適溫度分別為5.2和55℃。金屬離子Na^+、K^+、Li^+、Ca^2+能提高該酶的酶活,而另外一些金屬離子如Mg^2+、Mn^2+、Zn^2+、Fe^3+、Al^3+、Cu^2+能抑制其活性。該酶以水溶性玉米芯木聚糖、燕麥木聚糖、水不溶性木聚糖為底物時(shí),其相對(duì)酶活力分別為162%,139%,74%。