摘要：環(huán)氧化物水解酶能夠?qū)ν庀h(huán)氧化物進(jìn)行動(dòng)力學(xué)拆分保留單構(gòu)型的環(huán)氧化物。測(cè)定了菜豆環(huán)氧化物水解酶(PvEH1)針對(duì)苯基縮水甘油醚及其甲基衍生物的催化特性,并基于分子對(duì)接及多序列比對(duì)分析確定7個(gè)突變位點(diǎn),通過單點(diǎn)和組合突變對(duì)PvEH1進(jìn)行改造,以期改善PvEH1對(duì)鄰甲基苯基縮水甘油醚(1a)的催化特性。底物譜分析表明PvEH1對(duì)1a的催化活性(157.2U/g濕細(xì)胞)和對(duì)映選擇性(E=5.6)最高。單點(diǎn)突變結(jié)果顯示E.coli/pveh1 L105I和E.coli/pveh1^V106I對(duì)1a的催化活性和對(duì)映選擇性均有明顯提高;L105I和V106I位組合突變菌株E.coli/pveh1^L105I/V106I的催化活性(493.8U/g濕細(xì)胞)是E.coli/pveh1的3.1倍,對(duì)映選擇性(E=8.3)也提高至E.coli/pveh1的1.5倍。純化后PvEH1 L105I/V106I的催化活性為17.6U/mg,是PvEH1的1.5倍,對(duì)1a的催化效率提高至PvEH1的2.1倍。SDS-PAGE分析表明提高了蛋白質(zhì)的可溶性表達(dá)量。利用E.coli/pveh1^L105I/V106I全細(xì)胞催化100mmol/L 1a水解動(dòng)力學(xué)拆分獲得手性純(R)-1a (ee>96%)的產(chǎn)率和時(shí)空產(chǎn)率分別為31.2%和5.12g/(L·h),因此,在手性純(R)-1a的制備中,E.coli/pveh1^L105I/V106I是一種頗具潛力的生物催化劑。