摘要：將鵝細(xì)小病毒EP22株VP3基因克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFast-Bac-HTB中,酶切鑒定及測(cè)序篩選出陽(yáng)性重組轉(zhuǎn)座載體pFastBac-VP3,轉(zhuǎn)化至含有桿狀病毒穿梭載體Bacmid的DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,構(gòu)建桿狀病毒表達(dá)載體,獲得重組轉(zhuǎn)座子rBacmid-VP3,在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞,獲得到含鵝細(xì)小病毒VP3基因的重組桿狀病毒rBV-VP3。經(jīng)SDS-PAGE、Western-blot以及免疫組化試驗(yàn)證實(shí),VP3基因在Sf9細(xì)胞中成功表達(dá)。利用表達(dá)的VP3蛋白建立VP3-ELISA血清學(xué)檢測(cè)方法并對(duì)130份鵝血清樣品進(jìn)行檢測(cè),以中和試驗(yàn)作為金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果顯示,VP3-ELISA檢測(cè)方法的特異性為100%,敏感性為96.2%,并且VP3-ELISA與其他鵝病陽(yáng)性血清間不出現(xiàn)交叉反應(yīng)性。上述研究結(jié)果表明,本研究建立的VP3-ELISA是一種特異的、靈敏的血清學(xué)診斷方法。