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豬圓環(huán)病毒3型SYBR greenⅠ熒光定量PCR方法建立及初步應(yīng)用

作者:呂素芳; 李峰; 郭廣君; 魏鳳; 張文通; 沈志強(qiáng) 山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院山東省畜禽用蜂膠疫苗研究開(kāi)發(fā)推廣中心; 山東濱州256600; 山東綠都生物科技有限公司; 山東濱州256600

摘要:為建立一種快速、特異、敏感的SYBR greenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR方法,檢測(cè)豬圓環(huán)病毒3型(PCV3)在感染豬體內(nèi)的分布情況和病毒含量,本研究根據(jù)PCV3的cap基因序列設(shè)計(jì)1對(duì)引物,對(duì)反應(yīng)條件、反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化,建立了檢測(cè)PCV3 cap基因的SYBR greenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR方法,并對(duì)動(dòng)物回歸試驗(yàn)后剖檢的病料組織進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果,該方法比傳統(tǒng)PCR方法靈敏度高100倍,可達(dá)3.04×10^2拷貝/μL,且具有良好的特異性和重復(fù)性。在不同病料組織中均可檢測(cè)到PCV3,但不同感染豬、不同組織病毒檢出及含量有差異,其中肝臟、肺臟、頜下淋巴結(jié)中病毒含量顯著高于心臟、心包肌、腎臟等;肝中病毒拷貝數(shù)最高,達(dá)1.16×10^6拷貝/μL,表明PCV3具有一定的組織嗜性。該方法可用于PCV3的病原學(xué)監(jiān)測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查及定量研究。

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