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重組人pEGFP—heNOS質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人內(nèi)皮祖細胞及其條件優(yōu)化

作者:廖傳軍 郭連瑞 楊寶鐘 張望德 首都醫(yī)科大學附屬北京朝陽醫(yī)院血管外科 北京100020 首都醫(yī)科大學宣武醫(yī)院血管外科

摘要:目的用脂質(zhì)體介導重組人pEGFP—heNOS質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cell,EPC),并對其轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化以獲得較高轉(zhuǎn)染效率。方法脂質(zhì)體介導重組人pEGFP—heNOS質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人骨髓來源的內(nèi)皮祖細胞,改變質(zhì)粒及脂質(zhì)體劑量,在熒光顯微鏡下觀察熒光并計算轉(zhuǎn)染效率;轉(zhuǎn)染48h后逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT~PCR)和Westernblot方法檢測heNOS基因在內(nèi)皮祖細胞中的表達。結(jié)果重組人pEGFP—heNOS質(zhì)粒體外成功轉(zhuǎn)染入人內(nèi)皮祖細胞中,質(zhì)粒:脂質(zhì)體為1:1時轉(zhuǎn)染效率最高。結(jié)論成功地將重組人pEGFP—heNOS質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染入內(nèi)皮祖細胞中,通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件提高了轉(zhuǎn)染效率,為下一步基因治療提供了試驗基礎(chǔ)。

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