摘要：為建立鑒別檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬德?tīng)査跔畈《?PDCoV)和豬輪狀病毒(PRoV)的方法,本研究分別針對(duì)PEDVN基因、TGEVM基因、PDCoVM基因和PRoVVP6基因設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針,經(jīng)過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了同時(shí)檢測(cè)4種病毒的多重TaqMan熒光定量RT-PCR方法。結(jié)果顯示,該方法僅特異性擴(kuò)增PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV,與豬其它主要病毒無(wú)交叉反應(yīng),特異性較強(qiáng);對(duì)PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的最低檢出限分別為2.06×10^2拷貝/μL、2.06×10^2拷貝/μL、2.06×10^1拷貝/μL、2.06×10^3拷貝/μL,具有較高敏感性;組內(nèi)與組間變異系數(shù)均小于1.1%,具有良好的重復(fù)性。應(yīng)用該方法和普通多重RT-PCR檢測(cè)臨床采集的243份腹瀉病料樣品,兩者的符合率為96.71%。本研究建立的方法為臨床PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的鑒別檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查提供了一種快速、特異、敏感、高效的技術(shù)手段。