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miR-429在食管鱗癌中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖遷移的影響

作者:花光斌; 朱國(guó)璽; 蘇煜強(qiáng) 河南省焦作市焦煤集團(tuán)中央醫(yī)院心胸外科; 焦作454000

摘要:目的探討微小RNA-429(miR-429)在食管鱗癌(ESCC)中的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖及遷移的影響。方法選取本院45例ESCC患者手術(shù)切除的癌組織(ESCC組)及癌旁組織(正常組)標(biāo)本為研究對(duì)象,并采用實(shí)時(shí)熒光定量(qRT-PCR)檢測(cè)兩組miR-429表達(dá)水平。體外培養(yǎng)ESCC癌細(xì)胞株系ECa109及人正常食管上皮細(xì)胞株Het-1A,將轉(zhuǎn)染試劑、miR-429陰性對(duì)照質(zhì)粒、miR-429 mimic質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染ECa109細(xì)胞,命名為空白組、陰性轉(zhuǎn)染組、miR-429過(guò)表達(dá)組,同時(shí)應(yīng)用生物信息學(xué)工具預(yù)測(cè)miR-429的靶基因?yàn)镃Tl0激酶調(diào)節(jié)子樣蛋白(CRKL),熒光素酶活性檢測(cè)miR-429與CRKL的靶向調(diào)控關(guān)系。采用qRT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中miR-429與CRKL mRNA表達(dá)水平,蛋白免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞中CRKL蛋白表達(dá)。MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,Transwell檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。結(jié)果與正常組相比,ESCC組miR-429表達(dá)水平顯著降低(P﹤0.05);熒光素酶活性測(cè)定顯示3'UTR-Wt細(xì)胞中miR-429過(guò)表達(dá)組熒光素酶活性顯著低于陰性對(duì)照組(P﹤0.05),3'UTR-Mut細(xì)胞中miR-429陰性轉(zhuǎn)染組與過(guò)表達(dá)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05);與Het-1A細(xì)胞相比,ECa109細(xì)胞中miR-429表達(dá)水平顯著降低(P﹤0.05),而CRKL mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著升高(P﹤0.05);與空白組、陰性轉(zhuǎn)染組相比,miR-429過(guò)表達(dá)組miR-429表達(dá)水平顯著升高(P﹤0.05),而CRKL mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著降低(P﹤0.05);與空白組、陰性轉(zhuǎn)染組相比,miR-429過(guò)表達(dá)組細(xì)胞增殖率及遷移數(shù)量均顯著降低(P﹤0.05)。結(jié)論ESCC中miR-429呈低表達(dá),其可通過(guò)下調(diào)CRKL表達(dá)進(jìn)而抑制ESCC細(xì)胞增殖及遷移。

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