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人類(lèi)脂肪來(lái)源成體干細(xì)胞體外定向成軟骨的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)

作者:雷紫雄; 廖威明; 盛璞義; 付明; 何愛(ài)珊; 楊子波 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院關(guān)節(jié)外科; 廣州510080

摘要:目的 評(píng)價(jià)人類(lèi)脂肪來(lái)源成體干細(xì)胞(hADASc)體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因定向成軟骨誘導(dǎo)的可行性.方法 hADASc體外培養(yǎng)后行PGL3.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)基因轉(zhuǎn)染并鑒定,檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞Lueiferase活性相對(duì)光讀數(shù)(RLU),再行反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)和抗Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色(實(shí)驗(yàn)組:轉(zhuǎn)染的hADASc,同比對(duì)照組:加入軟骨細(xì)胞定向誘導(dǎo)培養(yǎng)基的未轉(zhuǎn)染hADASc;陰性對(duì)照組:未轉(zhuǎn)染的hADASc),自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)分析免疫染色圖片并計(jì)算陽(yáng)性顆粒(PU)值.結(jié)果 人類(lèi)皮下脂肪體外分離培養(yǎng)出具有干細(xì)胞特征的有核組織細(xì)胞.hADASc轉(zhuǎn)染后,實(shí)驗(yàn)組測(cè)得RLU值(9 212.583±315.240)高于陰性對(duì)照組(317.000±20.710,P<0.01).RT-PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染的hADASc表達(dá)TGF-β1;免疫染色結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組與同比對(duì)照組呈陽(yáng)性反應(yīng),且兩組PU值(13.864±2.416,13.637±2.548)均與陰性對(duì)照組的PU值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(6.013±0.827,P<0.05).結(jié)論 人類(lèi)皮下脂肪體外分離培養(yǎng)出具有干細(xì)胞特征的有核組織細(xì)胞.PGL3-TGF-β1基因轉(zhuǎn)染的hADASc可表達(dá)TGF-β1.內(nèi)源性TGF-β1可誘導(dǎo)hADASc分泌Ⅱ型膠原蛋白,與外源性TGF-β1作用相類(lèi)似.

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