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紫丁香查爾酮異構(gòu)酶基因SoCHI的克隆及表達(dá)分析

作者:王蕊; 李彥慧; 鄭健 北京農(nóng)學(xué)院園林學(xué)院北京林果業(yè)生態(tài)環(huán)境功能提升協(xié)同創(chuàng)新中心; 北京102206; 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園林與旅游學(xué)院; 河北保定071000

摘要:采用RACE技術(shù)從紫丁香(Syringa oblata Lindl.)花中克隆獲得查爾酮異構(gòu)酶基因(CHI)的cDNA全長(zhǎng)序列,命名為SoCHI,其編碼的蛋白質(zhì)為SoCHI蛋白。序列分析結(jié)果表明:SoCHI基因的開(kāi)放閱讀框(ORF)長(zhǎng)度為684bp,編碼227個(gè)氨基酸殘基,并且,該基因全部由外顯子構(gòu)成,無(wú)內(nèi)含子。SoCHI蛋白理論相對(duì)分子質(zhì)量24 988,理論等電點(diǎn)p I 5.53,不穩(wěn)定系數(shù)為47.58,平均親水指數(shù)為-0.096,并包含2個(gè)氫鍵結(jié)合位點(diǎn)、2個(gè)活性催化位點(diǎn)和7個(gè)底物結(jié)合位點(diǎn);在該蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)中,α-螺旋、延伸鏈和無(wú)規(guī)則卷曲分別占該蛋白質(zhì)氨基酸殘基總數(shù)的31.7%、20.3%和48.0%。同源性比對(duì)結(jié)果表明:紫丁香與其他9種植物CHI蛋白的同源性很高(均在76%以上),與同科[木犀科(Oleaceae)]植物桂花(Osmanthus fragrans Lour.)和油橄欖(Olea europaea Linn.)CHI蛋白的同源性更高(達(dá)88%)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增結(jié)果表明:SoCHI基因的相對(duì)表達(dá)量在紫丁香的嫩葉中最高,在成熟葉中次之;該基因的相對(duì)表達(dá)量在紫丁香花發(fā)育過(guò)程中先上升后下降,并在花蕾期達(dá)到最高。研究結(jié)果顯示:SoCHI基因編碼的氨基酸序列相對(duì)保守,且其表達(dá)與紫丁香花呈色關(guān)系密切。

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