摘要:目的:觀察白花香蓮解毒顆粒對HBV全基因組1. 3倍體Hep G2細(xì)胞模型(HBV 1. 3P)病毒復(fù)制與表達(dá)的影響。方法:按照白花香蓮解毒顆粒最優(yōu)提取工藝制備稠膏,并使用無菌純水配制為0. 1g稠膏/ml母液,濾紙及0. 45μM、0. 22μM孔徑PVDF超濾膜依次過濾后,應(yīng)用MEM完全培養(yǎng)基稀釋為8個濃度梯度的細(xì)胞干預(yù)液。CCK-8法測定細(xì)胞干預(yù)液對HBV 1. 3P增殖的抑制率; q PCR法檢測干預(yù)24h、48h后細(xì)胞上清液中HBV DNA水平;化學(xué)發(fā)光法檢測細(xì)胞上清液中HBs Ag、HBeAg表達(dá)量;免疫熒光法測定細(xì)胞內(nèi)HBs Ag表達(dá)強度。結(jié)果:(1)白花香蓮解毒顆粒的去乙酰車葉草酸甲酯含量為1. 23mg/g。(2)CCK-8法的最佳檢測時間是加入試劑后2h,適宜細(xì)胞數(shù)范圍是2×103~1. 2×104個。在0. 04~0. 625mg/ml范圍內(nèi)白花香蓮解毒顆粒對HBV 1. 3P增殖無明顯抑制作用;在1. 25~5mg/ml范圍內(nèi)則會顯著抑制HBV 1. 3P增殖。(3)0. 625mg/ml是白花香蓮解毒顆粒的最佳藥物濃度,其干預(yù)48h HBV DNA的抑制率達(dá)(41. 86±5. 35)%,并能顯著降低細(xì)胞上清液及細(xì)胞內(nèi)HBs Ag、HBeAg的表達(dá)。結(jié)論:白花香蓮解毒顆粒體外具能較強地抑制HBV復(fù)制及HBs Ag、HBeAg表達(dá)的生物活性。
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