摘要：目的:基于NF-κB信號通路探討?yīng)毣罴纳鷾种浦嗵钦T導(dǎo)的軟骨細胞炎癥反應(yīng)的作用機制。方法:取4周齡SPF級SD大鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨,分離軟骨細胞進行體外培養(yǎng)。取培養(yǎng)的第2代軟骨細胞,隨機分為5組?？瞻捉M中加入含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基,模型組加入含10 ng·mL^-1 脂多糖的10%FBS DMEM培養(yǎng)基,獨活寄生湯低、中、高濃度組加入含脂多糖(10 ng·mL ^-1 )和獨活寄生湯(濃度分別為100 μg·mL^-1 、200 μg·mL^-1 、300 μg·mL ^-1 )的10%FBS DMEM培養(yǎng)基。干預(yù)8 h后,采用ELISA法測定各組細胞培養(yǎng)液上清液中的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9含量,確定獨活寄生湯最佳干預(yù)濃度。隨后取培養(yǎng)的第2代軟骨細胞,隨機分為4組?？瞻捉M不進行干預(yù),模型組加入10 ng·mL ^-1 脂多糖,獨活寄生湯組加入10 ng·mL^-1 脂多糖和最佳濃度的獨活寄生湯,抑制劑組加入10 ng·mL ^-1 脂多糖和10 μmol吡咯烷二硫代甲酸銨鹽。干預(yù)8 h后,采用熒光定量PCR法檢測軟骨細胞中NF-κB基因含量、用免疫熒光檢測法觀察軟骨細胞中NF-κB蛋白核轉(zhuǎn)位情況。結(jié)果:①獨活寄生湯最佳干預(yù)濃度測定結(jié)果?？瞻捉M、模型組、獨活寄生湯低濃度組、獨活寄生湯中濃度組、獨活寄生湯高濃度組的MMP-9含量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義[(0.125±0.012)ng·mL ^-1 ,(0.154±0.008)ng·mL^-1 ,(0.148±0.012)ng·mL ^-1 ,(0.148± 0.010)ng·mL ^-1 ,(0.134±0.002)ng·mL^-1 ,χ^ 2=10.034,P =0.040]。模型組的MMP-9含量高于空白組和獨活寄生湯高濃度組( P=0.002,P =0.006);空白組與獨活寄生湯高濃度組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義( P =0.573);獨活寄生湯低、中濃度組MMP-9含量與模型組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義( P=0.483,P =0.356)。上述測定結(jié)果顯示獨活寄生湯最佳干預(yù)濃度為 300 μg·mL ^-1 。②軟骨細胞中NF-κB基因含量。空白組、模型組、獨活寄生湯組、抑制劑組的NF-κB基因含量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義[1.